[发明专利]一种用于半胱氨酸特异性检测的荧光化合物及制备方法

权利要求书

1.一种用于半胱氨酸特异性检测的荧光化合物的制备方法，其特征在于：所述荧光化合物为2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯基丙烯酸酯，其化学结构式如式（І）所示：

式（І）；

具体制备操作步骤如下：

（1）由1-（2-羟基苯基）乙酮、吡啶-2-胺和碘反应制备得到2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯酚（HPIP）；

（2）由2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯酚（HPIP）经过丙烯酰化反应制备得到2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯基丙烯酸酯。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，将200mg（1.47mmol）1-（2-羟基苯基）乙酮、318mg（3.38mmol）吡啶-2-胺和448mg（1.78mmol）碘混合；在温度80～130℃条件下，搅拌反应1～7小时；在温度60～80℃下搅拌12小时；加入25mL浓度45%的氢氧化钠（NaOH）水溶液，在温度100℃下搅拌1小时；冷却至室温，用25mL二氯甲烷稀释，用浓度10%的盐酸（HCl）水溶液调节pH值至中性；用10mL二氯甲烷萃取并用10mL去离子水洗涤三次；用5g无水硫酸钠（Na₂SO₄）干燥并减压浓缩；使用二氧化硅（SiO₂）色谱柱纯化，并用体积比为3：1的二氯甲烷和正己烷混合液洗脱；在乙醇和水系统中重结晶，纯化得到橙黄色固体的2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯酚（HPIP）。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，将500mg（2.4mmol）2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯酚溶于30mL无水二氯甲烷中，冷却至0℃；加入0.5g（4.8mmol）的三乙胺，并缓慢滴加入270mg（3.0mmol）丙烯酰氯；缓慢升温至室温，并搅拌12小时；通过薄层色谱硅胶板（TLC）监测反应进程，当反应完成时，将溶剂蒸发至干，通过洗脱硅胶柱分离产物，获得420mg白色固体的2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯基丙烯酸酯，产率为66.2%；所述洗脱液由正己 烷和乙酸乙酯按体积比6:1配制成。

4.一种2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯基丙烯酸酯在半胱氨酸特异性检测中的应用，其特征在于：用于溶液体系中半胱氨酸的检测，将所述2-（咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基）苯基丙烯酸酯用缓冲液配制成浓度为10μM的荧光化合物溶液，所述缓冲液由体积比为2:8的4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）和二甲基亚砜（DMSO）配制成，缓冲液的pH值为7.4；取二十三份3mL浓度10μM的荧光化合物溶液，分别对应加入200μM半胱氨酸（Cys），200μM高半胱氨酸（Hcy），200μM谷胱甘肽（GSH），200μM脯氨酸（proline），200μM天冬氨酸（aspartic acid），200μM色氨酸（tryptophan），200μM精氨酸（arginine），200μM酪氨酸（tyrosine），200μM组氨酸（histidine），200μM谷氨酸（glutamic acid），200μM赖氨酸（lysine），200μM苏氨酸（threonine），200μM甘氨酸（glycine），200μM硝酸钾（KNO₃），200μM硝酸钙（Ca(NO₃)₂），200μM硝酸钠（NaNO₃），200μM硝酸镁（Mg(NO₃)₂），200μM硝酸铜（Cu(NO₃)₂），200μM硝酸锌（Zn(NO₃)₂），200μM硝酸铁（Fe(NO₃)₃），200μM硫氢化钠（NaHS）、200μM双氧水（H₂O₂）、200μM葡萄糖，反应完全，得到二十三份反应物，分别对二十三份反应物进行荧光强度测定；半胱氨酸（Cys）与高半胱氨酸（Hcy）能够提高荧光化合物溶液荧光强度；荧光化合物与半胱氨酸（Cys）的反应速率为荧光化合物与高半胱氨酸（Hcy）反应速率的10倍，即所述荧光化合物可以特异性识别半胱氨酸。