[发明专利]基于RPA技术检测胡萝卜种子中的马铃薯斑纹片病菌的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测或辅助检测胡萝卜种子中的马铃薯斑纹片病菌的方法，其特征在于：

所述的方法包括如下步骤：

1）DNA提取

采用植物基因组DNA 提取试剂盒从待测胡萝卜种子中提取DNA；

2）RPA扩增

以提取的DNA为模板，采用由SEQ ID NO ：11所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列组成的引物对进行RPA扩增；

RPA扩增体系的配制方法如下：10μM/μL的引物各2.4μL，再水化缓冲液29.5μL，将以上体系混匀移入含有冻干酶粉的 0.2 mL 反应管中，再加入50ng DNA模板，加入2.5μL 280mmol/L醋酸镁溶液，去离子水补足至50 μL；所述RPA扩增的温度为40℃，时间为40 min；

3）对RPA扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断胡萝卜种子是否感染马铃薯斑纹片病菌，若扩增出354bp的目标条带，则说明感染，反之则否。