[发明专利]一种大分子furin抑制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种大分子furin抑制剂及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。所述大分子furin抑制剂是由D‑半乳糖、精氨酸富集多肽和载体蛋白通过共价键连接而成的大分子化合物，其制备方法包括利用多肽合成方法合成精氨酸富集多肽、半乳糖连接精氨酸富集多肽、乳糖化精氨酸富集多肽连接载体蛋白等步骤。本发明的大分子furin抑制剂的抑制效率高，进入细胞的能力强、细胞毒性低，肝脏靶向性好，因此具有很好的治疗慢性乙型肝炎的潜力。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种大分子furin抑制剂及其制备方法和应用。

背景技术

原蛋白转化酶furin是存在于人或动物细胞反面高尔基体网络内，并可在细胞膜、内吞体和高尔基体循环的一种蛋白酶。在生理上，furin参与了许多生长因子合成，从而对细胞生长、分化具有关键作用；在病理上，furin涉及肿瘤发生、病毒感染和细菌毒素中毒等过程，表明furin对于人类多种疾病来说是一个有治疗前景的靶点。

慢性HBV感染是当前的主要传染病，容易演变成慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌，预后不良，且缺乏根治手段。慢性乙型肝炎(CHB)主要分为早期的乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性CHB和后期的HBeAg阴性CHB等两类，其关键发病机制分别是HBeAg合成过多和HBeAg前体表达过少。原蛋白转化酶furin是控制HBeAg前体向HBeAg转化的关键环节。理论上讲，抑制furin可通过减少HBeAg合成和增加HBeAg前体表达同时实现HBeAg阳性CHB的早期治疗和后期HBeAg阴性CHB的预防，从而根本性提高慢乙肝的治疗效果，改善患者的预后。

水解蛋白时，furin识别位点的基本序列为N’-RXXR-C’(R为精氨酸，X为不定氨基酸)。目前，抑制furin的方法主要有基因沉默和小分子抑制剂。基因沉默因安全性问题很难用于临床治疗。小分子抑制剂是以识别位点的基本肽序列为基础制备，如decanoyl-RVKR-chloromethylketone(CMK)、hexa-D-arginine(D6R)、nena-D-arginine(D9R)和其他精氨酸富集化合物。这些小分子抑制剂有以下不足：

1、效率低：D6R和D9R常表现为体外对furin抑制作用明显，但在细胞模型上和动物体内的作用有限，其原因可能是furin主要存在细胞的细胞器中。由于细胞膜通透性差，导致这些抑制剂产生效应的浓度通常需要数百微摩尔水平，使得效率极低。同时因为细胞膜通透性差而停留在细胞膜上，对细胞膜产生破坏作用。因此，基本没有临床应用的可能性。

2、容易脱靶：CMK体外和细胞模型上都有效，但容易脱靶，除抑制furin外，还抑制蛋白酶体的胰蛋白酶样活性。对于HBV感染来说，该脱靶效应直接增加HBV复制，出现与治疗目的相反的效应。此外，细胞毒性较大。因此，CMK也基本没有临床应用的可能性。

3、副作用大：Furin在体内分布广，功能多。胚胎期抑制furin直接导致胚胎死亡。胚胎后期非选择性抑制furin虽然不至死，但可能出现意想不到的后果。有文献报道，小鼠外周血淋巴细胞中的furin敲减可导致自身免疫反应。

鉴于以上技术难题，本领域迫切需要一种人工构建的新型furin抑制剂，以期根本性提高慢乙肝的治疗效果，改善患者的预后。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种大分子furin抑制剂，该大分子furin抑制剂的抑制效率高，细胞毒性低，肝脏靶向性好，因此具有很好的治疗慢性乙型肝炎的潜力。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种大分子furin抑制剂，其是由D-半乳糖、精氨酸富集多肽和载体蛋白通过共价键连接而成的大分子化合物。