[发明专利]一种月季灰霉病抗病性鉴定方法

权利要求书

1.一种月季灰霉病抗病性鉴定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)从感染灰霉病的月季花瓣上分离纯化后得到灰霉菌株，将该菌株接种到15-35mL固体培养基上，在20℃～30℃黑暗条件下培养3-4周后产生分生孢子；

(2)将液体培养基稀释到质量百分比浓度为10-30％，取10-30mL倒入步骤(1)培养好的固体培养基中，刮取培养基表面的孢子及菌丝，过滤、滤去菌丝残体，获得清液，并用10-30％的液体培养基稀释，使孢子浓度为1×10^5～7个/mL得到孢子悬浮液；

(3)在托盘内倒入无菌水，上面覆盖一层吸水纸，水不没过纸面；取月季花完整花瓣放在吸水纸上，在每个花瓣中央接种3-6μL的孢子悬浮液，盖上托盘的盖子；

(4)72h后测量花瓣的病斑直径，并计算病斑面积，分析月季灰霉病抗性；

按以下等级进行月季花抗病性分级：

0级:接种72h后整个花瓣完全被侵染；

1级:接种72h后病斑面积超过组织的1/2；

2级:病斑面积大于液滴4倍，但小于接种组织的1/2面积；

3级:侵染扩展到液滴之外，病斑大小为液滴的2～4倍；

4级:开始侵染，病斑仅在接种液滴之内；

5级:接种液滴清澈，无任何侵染迹象。

2.根据权利要求1所述月季灰霉病抗病性鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中固体培养基为马铃薯蔗糖琼脂(PSA)培养基，具体配制方法为：将1L的蒸馏水烧开，新鲜去皮的马铃薯200g切成丝放入锅中，边煮边搅拌，待马铃薯软化后，过滤后取滤液，并用蒸馏水定容至1L，再加入18-22g蔗糖和18-20g琼脂煮沸，倒入瓶子中并封口，121℃高温高压灭菌，备用。

3.根据权利要求1所述月季灰霉病抗病性鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中液体培养基为马铃薯蔗糖培养基，具体配制方法为：将1L的蒸馏水烧开，新鲜去皮的马铃薯200g切成丝放入锅中，边煮边搅拌，待马铃薯软化后，过滤后取滤液，并用蒸馏水定容至1L，再加入18-22g蔗糖煮沸，倒入瓶子中并封口，121℃高温高压灭菌备用。