[发明专利]一种制备永生化树突状细胞的基因、载体、方法和永生化树突状细胞

权利要求书

1.一种制备永生化树突状细胞的基因，其特征在于，将ST40基因经linker与TAX2基因连接后，得到制备永生化树突状细胞的基因；

所述ST40基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述TAX2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述linker的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.一种制备永生化树突状细胞的载体，其特征在于，将权利要求1或2所述的基因插入原始载体中，得到制备永生化树突状细胞的载体。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述原始载体包括pCDH MSCV和/或pCDH-CMV。

5.一种制备永生化树突状细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将权利要求4所述的载体包装慢病毒，得到包装病毒，将所述包装病毒感染树突状细胞，得到感染树突状细胞；

2)将滋养细胞接种于细胞培养器的上层培养室，将所述步骤1)得到的感染树突状细胞接种于细胞培养器的下层培养室，培养4～6周，除去CD3+细胞后继续培养1～2周，除去CD3+细胞后继续培养2个月以上，得到永生化树突状细胞。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)滋养细胞的制备包括：将外周血单个核细胞在含有质量百分含量为10％的FBS的1640培养基中培养过夜，得到滋养细胞。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤1)树突状细胞来源于外周血单个核细胞。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)滋养细胞的接种量为0.5～1.5×10⁶个/孔，所述感染树突状细胞的接种量为0.5～1.5×10⁶个/孔。

9.权利要求5～8任一项所述的方法制备得到的永生化树突状细胞，所述永生化树突状细胞的表型包括：CD3-、CD4+、CD8-、CD16-、CD56-、CD11c+、CD58+、CD40+、CD70+、CD80+、CD83+、CD86+、TCR-、CD11b-、CD197-、CD303-、CD1c-、CD205+、CD141和CD123+。