[发明专利]一种野生铁核桃粕中多肽的提取及抗氧化测定方法

权利要求书

1.一种野生铁核桃粕中多肽的提取方法，其特征在于，所述野生铁核桃粕中多肽的提取方法包括以下步骤：

步骤一，配制核桃粕溶液，向配制好的核桃粕溶液中加入NaOH，调节溶液pH值为中性；

步骤二，向调节好的中性溶液中加入复合酶水解3小时；

步骤三，在80～85℃下灭活蛋白酶10min；

步骤四，利用离心机以3000r/min的速度离心15min，取上清，即为核桃粕多肽溶液。

2.如权利要求1所述野生铁核桃粕中多肽的提取方法，其特征在于，步骤一中，所述核桃粕溶液配制方法包括：

首先，选取无虫蛀、无腐烂霉变的核桃粕，称量选取好的核桃粕50g，按核桃粕与水1：8的比例溶于水中，浸泡10h；

其次，将浸泡好的核桃粕溶液用磁力搅拌机搅拌打浆在20min，将打好的溶液静置至室温，即得核桃粕溶液。

3.如权利要求1所述野生铁核桃粕中多肽的提取方法，其特征在于，步骤二中，所述加入复合酶水解还包括：

所述复合酶由中性蛋白酶：植物蛋白酶＝2：1调配而成；

酶解时间为3小时，酶解温度为50摄氏度，加酶量为8000U/g。

4.一种利用权利要求1所述野生铁核桃粕中多肽的提取方法提取的野生铁核桃粕中多肽。

5.一种利用权利要求4所述野生铁核桃粕中多肽制备的多肽医疗保健品。

6.一种如权利要求4所述野生铁核桃粕中多肽的多肽溶液氧化能力测定方法，其特征在于，所述所述多肽抗氧化测定方法包括：

(1)多肽对DPPH自由基清除能力的测定方法：

吸取50μL制备好的核桃粕多肽溶液，添加2mL 0.19mmo1/L DPPH溶液，充分摇晃震动，在暗处、室温的条件下放置10min，然后在517nm波长处比色测定，用蒸馏水作为空白；选择阿魏酸用于绘制标准的曲线，并且列出回归方程为y＝451.75x+31.31；

自由基清除能力表示为每克样品中阿魏酸当量，单位为μmol FAE/g；

DPPH自由基清除率，单位为％，计算公式如下：

其中，A₀表示DPPH溶液本身的吸光度即空白对照；A表示样品或者阳性对照的DPPH溶液的吸光度；

(2)多肽对FRAP/总抗氧化能力的测定方法：

1)配制FRAP溶液：乙酸缓冲溶液、六水三氯化铁和10mmol/L的三吡啶基三嗪，以体积比10:1:l充分混匀；

2)吸取100μL核桃粕多肽溶液加入3mL FRAP溶液充分混合，于37℃反应4min，在593nm波长处测定吸光度，用蒸馏水替代上清液作为空白；用硫酸亚铁绘制标准曲线，建立回归方程为y＝6.24x+0.0005；FRAP表示为每g上清液中Fe²⁺浓度当量，单位为μmolFE/g；

(3)多肽对ABTS⁺清除能力的测定方法：

第一步，配制ABTS工作液的配制：将7mmol/L的ABTS和1.45mmol/L的过硫酸钾两种溶液等体积混合，于4℃条件下反应16h，得到ABTS工作液；

第二步，吸取50μL核桃粕多肽溶液，加入2.8mL ABTS工作液，室温条件下反应6min，于734nm波长处测定吸光度，用水替代上清液作为空白；用Trolox绘制标准曲线，建立回归方程为y＝102.95x+1.5663；自由基清除能力表示为每克样品中Trolox当量，单位为μmolTE/g；

其中，A₀表示ABTS溶液本身的吸光度即空白对照；A₁表示样品或者阳性对照的ABTS溶液的吸光度。