[发明专利]一种治疗肝硬化的干细胞生物制品及其制备方法与应用

说明书

为克服现有肝硬化常规治疗方法效果不足的问题，本发明提供了一种干细胞生物制品，包括间充质干细胞，所述间充质干细胞经转染引入有载体，所述载体上包括CCR9基因序列。同时，本发明还公开了上述干细胞生物制品的制备方法及应用。本发明提供的干细胞生物制品，利用CCL25与受体CCR9结合具有细胞趋化的作用，提高了间充质干细胞在肝硬化病灶部位的特异性归巢能力，提高局部干细胞数量，有效提高间充质干细胞对肝硬化的治疗效果。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种治疗肝硬化的干细胞生物制品及其制备方法、应用。

背景技术

肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害，以肝组织弥漫性纤维化、假小叶和再生结节形成为特征的慢性肝病。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。本病发病高峰年龄在35～48岁，男女比例约为(3.6～8)：1。

研究表明，趋化因子CCL25在正常肝组织、肝纤维化以及肝硬化病人肝组织中均有表达，肝脏发生纤维增生性损伤时，肝内的CCL25的含量显著增加，同时随着肝纤维化向肝硬化病程加深，肝硬化病人的肝组织中CCL25含量最高。骨髓源性肝干细胞可以在CCL25的趋化作用下迁移并定植到肝脏损伤部位，补充因为疾病损伤而减少的肝细胞数量、修复因为疾病损伤而破坏了的肝组织结构。

发明内容

针对现有肝硬化常规治疗方法效果不足的问题，本发明提供了一种治疗肝硬化的干细胞生物制品及其制备方法、应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种干细胞生物制品，包括间充质干细胞，所述间充质干细胞经转染引入有载体，所述载体上包括CCR9基因序列。

可选的，所述间充质干细胞为分离于哺乳动物体外的间充质干细胞，所述间充质干细胞包括脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和牙髓间充质干细胞中的一种或多种。

可选的，所述载体选自质粒载体，所述质粒载体包括pcDNA3.1+、pcDNA3.1-HisA,B,C、pcDNA3.1-3xflag和pcDNA6/MYC-HIS A,B,C中的一种或多种。

可选的，所述CCR9基因序列包括如SEQ ID NO.9所示的序列，转入CCR9基因序列的载体包括如SEQ ID NO.10所示的序列。

另一方面，本发明提供了如上所述的干细胞生物制品的制备方法，包括以下操作：

获取CCR9目的基因；

构建包括CCR9基因序列的载体；

获取间充质干细胞；

载体转染间充质干细胞。

可选的，所述“获取CCR9目的基因”包括以下操作：

收取肝组织样本，提取总RNA，设计扩增引物，以逆转录-聚合酶链式反应法PCR扩增CCR9基因全长，电泳，纯化CCR9目的基因片段。

可选的，所述“构建包括CCR9基因序列的载体”之后，将包括CCR9基因序列的载体转染至原核细胞中进行扩充培养，提取包括CCR9基因序列的载体。

可选的，所述“获取间充质干细胞”的途径包括获取脐带、胎盘、脂肪、骨髓或牙髓，进行培养和分离，得到间充质干细胞。

可选的，所述“载体转染间充质干细胞”的方式包括电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。

另一方面，本发明提供了如上所述的干细胞生物制品在制备治疗肝硬化的药物中的应用。