[发明专利]一种SNK细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201911401401.7 | 申请日： | 2019-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN110904052A | 公开（公告）日： | 2020-03-24 |
| 发明（设计）人： | 焦顺昌;张嵘;李营营 | 申请（专利权）人： | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吕纪涛 |
| 地址： | 102200 北京市昌平区双*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 snk 细胞 培养 方法 | ||
1.一种SNK细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将IL-2基因连接到载体中，经慢病毒包装后感染PBMC，得到携带有IL-2基因的PBMC；
2)将41BBL基因和MICA基因连接到载体中，经慢病毒包装后感染PBMC，得到携带有41BBL基因、MICA基因的PBMC；
3)将所述步骤1)得到的携带有IL-2基因的PBMC和步骤2)得到的携带有41BBL基因、MICA基因的PBMC进行共培养，得到SNK细胞。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤1)IL-2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤2)41BBL基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤2)MICA基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
5.根据权利要求1、3或4所述的培养方法，其特征在于，所述41BBL基因和MICA基因通过第一连接基因进行连接，将得到的连接序列连接到载体中，所述第一连接基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤3)携带有IL-2基因的PBMC和携带有41BBL基因、MICA基因的PBMC的体积比为(450～550):(0.5～1.5)。
7.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤1)IL-2基因与GFP基因通过第二连接基因连接后，将得到的连接序列连接到载体中，所述第二连接基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。
8.根据权利要求1、5或7所述的培养方法，其特征在于，所述载体包括pCDH载体。
9.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述GFP基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示。
10.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养的温度为35～42℃，所述培养在5％CO2下进行。
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