[发明专利]一种利用工业色谱技术同时制备两种二氢黄酮苷类单体化合物的方法

说明书

本发明公开了一种利用工业色谱技术同时制备两种二氢黄酮苷类单体化合物的方法，二氢黄酮苷类单体化合物为柚皮苷、新橙皮苷，纯度均在99.5％以上。本发明的方法可实现分离过程实时在线监测，工艺重现性好、操作简单、制备过程短，且有机溶剂用量少、经济环保，经济效益高，可大批量工业化生产。

技术领域

本发明属于中药活性成分分离纯化技术领域，特别涉及一种利用工业色谱技术同时制备两种二氢黄酮苷类单体的方法，具体为一种利用工业动态轴向压缩柱系统同时制备柚皮苷及新橙皮苷的方法。

背景技术

枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrussinensis Osbeck的干燥幼果,具有破气消积、化痰散痞的功效,用于积滞内停、痞满胀痛、泻痢后重、大便不通、痰滞气阻、胸痹、结胸、胃下垂、脱肛、子宫脱垂等症。文献报道，枳实中主要含有黄酮类、生物碱类、挥发油类、香豆素类等成分。药理作用方面，包括对胃肠道的作用、抗氧化作用、抗炎作用、抗菌作用等。对胃肠道的作用，主要的活性成分为黄酮类和挥发油类。研究表明，枳实中的几种二氢黄酮类成分(如新橙皮苷、柚皮苷等)可改善功能性消化不良大鼠的胃排空和小肠推进，能够改善由吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡症状，适合于开发治疗功能性消化不良的药物。但对于二氢黄酮类成分来说存在分离过程繁琐复杂，有机溶剂用量大等问题，导致目前二氢黄酮类成分标准品数量较少且昂贵，这严重限制枳实/枳壳及其相关产品质量控制，影响枳实/枳壳进一步的研究开发。因而开发一种简单、快速分离纯化高纯度二氢黄酮类成分的方法是当前研究的重点。

单体活性成分分离纯化是中药材研究的最主要内容之一，为药材开展研究的前期基础也是影响研究速度的关键环节，传统分离纯化方法和技术有很多，包括有机溶剂萃取法、重结晶法、沉淀法和色谱法等，以上方法均存在有机溶剂用量大，制备过程繁琐，生产周期长，制备单体纯度不高及难以工业化推广等缺陷。目前新橙皮苷和柚皮苷成分无法大量制备，这严重限制了含新橙皮苷和柚皮苷成分的药材及其相关产品质量控制。因而开发一种简单、快速分离纯化高纯度新橙皮苷和柚皮苷成分的方法是当前研究的重点。

CN1053997874A公开了一种从枳实中提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法、CN106220698A公开了一种从枳实中分离高纯度橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的方法、CN102617673A公开了一种从胡柚白皮层分离纯化柚皮苷和新橙皮苷的方法、CN1594344A公开了一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法、CN101293906A公开了一种从枳壳中提取高纯度新橙皮苷的方法、CN1431216A公开了一种枳壳柚皮苷的提取方法、CN109912666A公开了一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法。然而这些工艺要么制备的有效成份纯度都不高，是多种物质的混合物，没做到彻底的分离纯化；要么各种成份的纯度和收率不高；要么分离纯化工艺难以工业化，只能实现小批量生产，且分离过程无法实现实时在线监测，分离过程盲目，灵敏度低。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种利用工业色谱技术同时制备两种二氢黄酮苷类单体的方法，该方法包括将总黄酮苷提取物样品溶液注入动态轴向压缩柱系统纯化分离得到柚皮苷、新橙皮苷两个单体化合物，具备有机溶剂用量少、制备过程简单、生产周期短、易于工业化、环境友好等特点。

本发明提供一种利用工业色谱技术同时制备两种二氢黄酮苷类单体化合物的方法，所述二氢黄酮苷类单体化合物为柚皮苷及新橙皮苷，包括以下步骤：

取总黄酮苷提取物，加入适量溶剂1将其溶解并配成一定浓度的溶液，过滤，制得样品溶液；将样品溶液按一定进样量注入工业动态轴向压缩柱系统中，再用溶剂2进行洗脱，用双波长紫外在线检测器检测分离各成分情况，收集各成分的洗脱液，再分别进行浓缩、干燥。

作为优选，总黄酮苷提取物为枳实和/或枳壳的总黄酮苷提取物；和/或，总黄酮苷提取物中柚皮苷含量为10.0％-40.0％(W/W)，优选为15.0％-40.0％(W/W)；新橙皮苷含量为15.0％-50.0％(W/W)，优选20.0％-45.0％(W/W)。