[发明专利]一种用于定性参苓白术散的引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于定性参苓白术散的检测试剂，其特征在于，所述试剂包括：人参、茯苓、白术、山药、莲子、薏苡仁的扩增引物和内控引物；

所述人参、茯苓、白术、山药、莲子和薏苡仁的扩增引物序列如下：

人参扩增引物序列：

Rensen-F：5’-CGGGACAATAAATAACAATACCGGGCTGATTC-3’；

Rensen-R：5’-GCCAGTTAAGGACAGGAGCGC-3’；

茯苓引物序列如下：

Fuling-F：5’-GAACGGGAACCCTAGAAATCGTTAAGG-3’；

Fuling-R：5’-CTAATCTGTTTGTCCATCCGACCCG-3’；

白术引物序列如下：

Baizhu-F：5’-GTGACGCAACTATCGGGTCCT-3’；

Baizhu-R：5’-CGGTGTTTGTTTACGTGCCGG-3’；

山药引物序列如下：

Shanyao-F：5’-AAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAA-3’；

Shanyao-R：5’-GTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGA-3’；

莲子引物序列如下：

lianzi-F：5’-AGAGTTGGTGCAGATGTTGGCCTC-3’；

lianzi-R：5’-TCACACACTCGACACCCCAATGA-3’；

薏苡仁引物序列如下：

Yiyiren-F：5’-AAGACGAGGTGGGCCAAAGTT-3’；

Yiyiren-R：5’-ACGTGATGTGCACGACACGA-3’；

所述内控引物为真核生物18s rDNA扩增引物；

所述真核生物18s rDNA扩增引物序列如下：

18s rDNA-F：5’- GGAAGGATCATTGTCGAAACCTGC-3’；

18s rDNA-R：5’- GTGCCAGTATTTAGCCTTGGACGGAATTTACC-3’。

2.一种用于定性检测参苓白术散的检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述检测试剂和阳性对照。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为分别含有真核生物18s rDNA基因以及人参基因组DNA、茯苓基因组DNA、白术基因组DNA、山药基因组DNA、莲子基因组DNA和薏苡仁基因组DNA的pUC57载体质粒。

4.权利要求2~3任一项所述的检测试剂盒在参苓白术散定性检测中的应用，其特征在于，参苓白术散定性检测试剂使用方法如下所示：

1）从“参苓白术散”样品中提取DNA；

2）使用如权利要求2~3任一项所述试剂盒对样品DNA进行PCR扩增；

3）参照阳性对照，定性样品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增反应体系为：

。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述PCR反应条件为：

95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃复性10s，72℃延伸30s；循环40次。