[发明专利]一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1：提取检测样本中的RNA,所述样本需来自新鲜样本，例如新鲜血液、手术切除/穿刺的肿瘤新鲜样本/超低温冷冻样本/保存在RNA稳定液中的样本；

步骤2：将提取的RNA逆转录为cDNA；

步骤3：以cDNA为模板，在异常剪切点靶标区域分别设计相应引物对和探针，其中C4BPB基因上游引物和下游引物分别位于待扩增靶向异常剪切点的两端，探针横跨异常剪切点；

步骤4：以步骤2中的cDNA为模板，用步骤3中设计的引物和探针进行实时荧光PCR扩增反应；

步骤5：根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果：监测反应体系的FAM和VIC荧光强度，以FAM达到设定的阈值时所需要的循环次数Ct值作为阴阳性判定标准，Ct值大于等于38：阴性；，Ct值小于38：阳性。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于：步骤3中设计C4BPB基因4号外显子3’端异常剪切的上游引物和下游引物分别位于4号外显子区和下游内含子区，探针设计位置横跨C4BPB基因4号外显子3’端异常剪切点。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于，C4BPB基因4号外显子3’端异常剪切的上游引物为SEQ ID NO:1：CCTGTGCTGGTGAATGGAGA，下游引物为SEQ ID NO:2：ACCTAGTAGGACAGGACCCC，探针为SEQ IDNO:3：AGTAGTAAGTACAAGAGA。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，步骤3中设计C4BPB基因5号外显子5’端异常剪切的上游引物和下游引物分别位于5号外显子上游内含子区和5号外显子区，探针设计位置横跨C4BPB基因5号外显子5’端异常剪切点。

5.根据权利要求4所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于，C4BPB基因5号外显子5’端异常剪的上游引物为SEQ ID NO:4：GAAGATGGGCTGGGGGAAAG，下游引物为SEQ ID NO:5：CACACTCTGGTTTGGGAGCT，探针为SEQ IDNO:6：TCTCTCAGGGGACTGTGA 。

6.根据权利要求1所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于，步骤3中设计阳性对照基因的引物对和探针，所述阳性对照基因是人管家基因ATP6IP1，上游引物和下游引物分别位于1号外显子区和2号外显子区，探针设计位置横跨1号和2号外显子剪切位点。

7.根据权利要求6所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于，阳性对照基因ATP6IP1上游引物是SEQ ID NO:7：AGTGGAGGCTGAGGCTATGA，下游引物是SEQ ID NO:8：GAGGCTGGCATTGAGCTTCA，探针是SEQ ID NO:9：GGCTGCCGGTGTTTTTGTC。

8.根据权利要求1所述的一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的方法，其特征在于，特异性探针5’端修饰有FAM或VIC，3’端修饰有NFQ-MGB。

9.一种用于检测肿瘤组织C4BPB基因内含子保留异常剪切的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-8任一所述方法中所使用的引物对和探针。