[发明专利]一种主动免疫调控微粒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种主动免疫调控微粒，包括微载体，所述微载体上至少负载有SYNZIP1多肽、SYNZIP2多肽、核酸分子CpG、T细胞促进剂、抗体Fc段和抗原，所述SYNZIP1多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述SYNZIP2多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明中的主动免疫调控微粒可以克服肿瘤微环境的免疫抑制环境，打破免疫耐受，提高整个免疫系统对肿瘤抗原的免疫应答，快速高效的激活肿瘤特异性B细胞和T细胞的免疫反应杀伤肿瘤，通过细胞因子的刺激还可以促进免疫细胞的扩增。以通过皮下注射的方式给药，并且可以通过毛细血管被动靶向到肿瘤组织内部，迅速的被免疫细胞和肿瘤细胞内吞。

技术领域

本发明涉及疫苗制剂领域，特别是涉及一种主动免疫调控微粒及其制备方法和应用。

背景技术

治疗性疫苗(Therapeutic Vaccine)是近年建立和发展起来的肿瘤免疫治疗新概念，是指能够打破慢性感染者体内免疫耐受，重建或增强免疫应答的疫苗。肿瘤治疗性疫苗的基本原理是通过靶向肿瘤相关或肿瘤特异性的抗原肽，提升免疫系统对于含此类抗原肽的癌细胞的识别与杀伤能力。具体步骤包括以下四步：1)外源抗原进入机体后，被抗原呈递细胞(APC)以胞吞形式摄入，进而在胞内被水解为能与MHC-I或MHC-II类分子结合的抗原肽片段；2)通过MHC将抗原肽递呈至APC表面，形成pMHC复合物；3)通过与pMHC-TCR的互作，被MHC-II类分子呈递的抗原肽可激活CD4+T细胞，释放多种细胞因子促使相关免疫细胞的活化和增殖，被MHC-I类分子呈递的抗原肽可激活CD8+T细胞；4)CD8+T细胞在pMHC I-TCR和CD4+Th细胞的共同刺激下进一步分化形成细胞毒性淋巴细胞(CTL)，通过分泌穿孔素等细胞毒素直接杀伤靶细胞，从而实现消除肿瘤的作用。根据肿瘤疫苗的来源，可分为肿瘤细胞疫苗、基因疫苗、多肽疫苗、树突状细胞疫苗等，根据作用机制不同治疗性疫苗可分为两类，一类是通过产生效应细胞起作用，如产生特异性杀伤性T细胞，用于肿瘤治疗或是清除病毒(HBV、HCV、HIV、HPV等)感染细胞；另一类是通过诱导体内产生抗体起作用，抗体可以结合活性分子进而封闭活性分子的功能，抗体还可以通过补体及ADCC效应杀伤肿瘤细胞。肿瘤疫苗作为肿瘤免疫治疗的一个分支，相对于传统肿瘤治疗“杀敌一千自损八百”的方式，肿瘤疫苗能在有效避免健康细胞损伤的前提下激活免疫系统，具有很好的开发前景。肿瘤免疫疗法相比于传统疗法，具有独特的优势。由于免疫疗法的机制在于激活自身的免疫系统，识别并清除肿瘤细胞，因此一旦起效，患者将有可能获得动态的、持续的抗肿瘤免疫反应，肿瘤复发率低，甚至对于晚期癌症可实现临床治愈。

目前治疗性疫苗存在的技术问题：1、内源性蛋白作为抗原产生的抗体起效慢、滴度低，一般的肿瘤疫苗其发挥疗效一般需要3-4个月的时间，且有可能需要进行多次免疫，发挥作用所需的周期太长，并且刺激产生的特异性抗体滴度过低。2、刺激产生的抗体特异性差，3，肿瘤免疫耐受的问题。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种主动免疫调控微粒及其制备方法和应用，用于解决现有技术中疫苗的抗肿瘤效果不佳的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供第一方面提供一种主动免疫调控微粒，所述主动免疫调控微粒包括微载体，所述微载体上至少负载有SYNZIP1多肽、SYNZIP2多肽、核酸分子CpG、T细胞促进剂、抗体Fc段和抗原，所述SYNZIP1多肽的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示，所述SYNZIP2多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明第二方面提供主动免疫调控微粒的制备方法，至少包括如下步骤：

1)制备SYNZIP2-CpG-微载体颗粒；

2)将SYNZIP1分别与T细胞促进剂、抗体Fc段和抗原连接，获得连接物I、连接物II和连接物III；

3)将连接物I、连接物II和连接物III和SYNZIP2-CpG-微载体颗粒混合，获得所述主动免疫调控微粒。