[发明专利]一种用于测定植物激素独脚金内酯分布的表达载体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于测定植物激素独脚金内酯分布的表达载体，其特征在于：所述表达载体含有以下组件：35S强启动子、SMAX1-like7、Venus和NLS；所述组件的连接方式为35S-SMAX1-like7-Venus-NLS；所述SMAX1-like7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体的原始骨架为pEGAD；作为优选的，所述pEGAD切除了GFP。

3.根据权利要求1或2所述的表达载体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、采用pEGAD为原始质粒，酶切去除GFP，得到pEGAD载体骨架；

S2、在所述pEGAD载体骨架中连入Venus，得到Venus-pEGAD载体骨架；

S3、在所述Venus-pEGAD载体骨架的Venus后端连入NLS，得到Venus-NLS-pEGAD载体骨架；

S4、在所述Venus-NLS-pEGAD载体骨架的Venus前端连入SMAX1-like7即得。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的酶切为采用Age1和EcoR1进行双酶切。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述连入Venus包括以下步骤：

设计含酶切位点Spe1和EcoR1的引物扩增得到Venus片段；

采用Spe1和EcoR1双酶切Venus片段后与所述pEGAD载体骨架连接。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述连入NLS包括以下步骤：

设计含酶切位点Sma1和Xho1引物扩增得到NLS片段；

对所述NLS片段和Venus-pEGAD载体骨架分别进行Sma1和Xho1双酶切后连接。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述连入SMAX1-like7包括以下步骤：

设计含酶切位点Age1和Spe1引物扩增得到SMAX1-like7片段；

对所述SMAX1-like7片段和Venus-NLS-pEGAD载体骨架分别进行Age1和Spe1双酶切后连接。

8.根据权利要求1或2所述的表达载体在测定植物激素独脚金内酯分布的方法中的应用，其特征在于：包括以下步骤：

S01、转基因植株的制备：将所述表达载体转入植物中得到转基因植株；

S02、独脚金内酯的测定：通过所述转基因植株中的荧光强度分析SL的分布和含量。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述转基因植株的制备包括以下步骤：将所述表达载体电击转化到农杆菌中；转化后的农杆菌进行活化后对需测定的抽苔期的植株进行浸染；浸染后的植株收种后进行抗性筛选即得。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述独脚金内酯的测定包括以下步骤：利用共聚焦显微镜观察所述转基因植株的荧光强度，根据荧光强弱得出独脚金内酯在植株中的分布情况；采用显微镜操作软件对荧光强度进行数据分析，进而测定独脚金内酯的含量。