[发明专利]一种用于测定植物激素独脚金内酯分布的表达载体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于测定植物激素独脚金内酯分布的表达载体及其制备方法与应用，所述表达载体以pEGAD为骨架并含有以下组件：35S强启动子、SL受体复合体的下游抑制因子基因SMAX1‑like7、荧光标记基因Venus和核定位序列NLS；该表达载体通过转入植物中得到转基因植株，通过共聚焦检测转基因植株中的荧光强度分析SL的分布。SL是一种新型植物激素，目前报道的测量方法非常有限；本发明的表达载体，在不同浓度SL的环境下，表现出不同的荧光强度，通过对荧光强度的变化及定量分析来实现对SL的精准测定。

技术领域

本发明涉及生物检测方法技术邻域，具体涉及一种用于测定植物激素独脚金内酯分布的表达载体及其制备方法与应用。

背景技术

植物激素通过调节细胞的生长发育来调节种子萌发、形态建成、成熟衰老和死亡等过程，越来越多的植物激素被发现和研究，独脚金内酯(SL，Strigolactone)就是其中一种。独脚金内酯是一类类胡萝卜素的植物次级代谢产物，也是最近几年发现并且研究火热的一种新型植物激素，对植物生长发育以及植物“绿色革命”非常大的意义和价值。独脚金内酯是一类倍半萜烯化合物，其骨架都包含1个ABC三元环和一个完全相同的D环；独脚金内酯是多种植物激素的统称，包括独角金醇、高粱内酯、列当醇和人工合成的类似物GR24、GR6、GR7等植物激素；其中，高粱内酯的结构式如下：

SL广泛存在于单子叶和双子叶植物以及一些藻类中，可以抑制植物分枝，控制中胚轴延长，还可以通过抑制侧根形成和刺激根毛伸长来调节跟的发育，以及具有刺激寄生植物种子萌发的作用。由于SL能够产生多种生理作用参与植物生长发育调节，因此，对植物体内SL的测定具有十分重要的意义。然而，目前对于SL的测定需要对植物进行提取分离后通过LC-MS进行分离产物的测定，并没有对于植物体内SL的直接测定方法；由于SL的种类和衍生物数目比较大，使得对其直接测定成为一个非常困难且有意义的技术。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种表达载体，能够用于测定植物激素独脚金内酯分布。

本发明还提出上述表达载体的制备方法。

本发明还提出上述表达载体在测定植物激素独脚金内酯分布的方法中的应用。

根据本发明的第一方面实施例的一种用于测定植物激素独脚金内酯分布的表达载体，所述表达载体含有以下组件：35S强启动子、SMAX1-like7、Venus和NLS；所述组件的连接方式为35S-SMAX1-like7-Venus-NLS；所述SMAX1-like7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

根据本发明的第一方面实施例的表达载体，至少具有如下有益效果：本发明所述的表达载体中的SMAX1-like7(基因)表达的SMAX1-like7蛋白是SL受体复合体的下游抑制因子，在植物体内表达的带有Venus荧光基团的SMAX1-like7蛋白能够表征植物体内SL的含量，通过荧光信号即可测定植物中SL的分布情况，为植物体内SL的直接测定提供了一个有效的工具，从而实现活体植物体内SL的测定；表达载体中的35S强启动子能够启动其他基因(即下游SMAX1-like7)的过量表达；将标记的荧光蛋白置换成Venus，这使得该系统检测起来更灵敏和快速。

根据本发明的一些实施例，：所述表达载体的原始骨架为pEGAD；作为优选的，所述pEGAD切除了GFP。

根据本发明的第二方面实施例的制备方法，包括以下步骤：

S1、采用pEGAD为原始质粒，酶切去除GFP，得到pEGAD载体骨架；

S2、在所述pEGAD载体骨架中连入Venus，得到Venus-pEGAD载体骨架；