[发明专利]用于荧光素酶和核苷磷酸的发光检测的稳定制剂

权利要求书

1.一种用于增加发光信号的半衰期的方法，所述方法包括：

使包含荧光素酶的样品与包含D-荧光素、L-荧光素和三磷酸腺苷(ATP)的组合物接触以形成反应测定混合物，其中D-荧光素与L-荧光素的浓度比为1:1至4:1；以及

其中与包含D-荧光素且基本上无L-荧光素的可比较的反应测定混合物相比，发光信号的半衰期增加，并且其中所述组合物在0℃至35℃的温度下储存至少1天后保留原始活性的50％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述发光信号的半衰期增加了至少约25％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述样品还包含：

(i)表达所述荧光素酶的细胞，或

(ii)包含所述荧光素酶的澄清的细胞提取物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中使所述细胞裂解，并且样品包含含有所述荧光素酶的裂解的细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞是原核细胞或真核细胞。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述D-荧光素是D-5'氟荧光素，所述L-荧光素是L-5'氟荧光素，并且其中所述可比较的反应测定混合物包含D-5'氟荧光素并且基本上无L-5'氟荧光素。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中D-荧光素与L-荧光素的浓度比为2:1至4:1。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述组合物中L-荧光素的浓度为至少25μM。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述组合物中L-荧光素的浓度为至少100μM。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述荧光素酶是甲虫荧光素酶。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述组合物具有至少5且小于9的pH。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含至少一种选自如下的额外组分：缓冲剂、蛋白质稳定剂、镁离子、金属螯合剂、洗涤剂、消泡剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐、AMP、辅酶A、还原剂或以上的组合，或者其中所述组合物包含硫酸镁和反式-1,2-环己二胺四乙酸(CDTA)。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含至少一种选自如下的额外组分：1,4-哌嗪二乙磺酸、1,2-二氨基环己烷四乙酸、Tergitol洗涤剂、Mazu消泡剂、硫酸镁、ATP、辅酶A、焦磷酸盐、DTT、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、氟化钠、十二烷基三甲基铵、羟基聚乙氧基十二烷、消泡剂、磷酸钾、乙二胺四乙酸(EDTA)和AMP。

14.一种用于测定样品中ATP的存在或量的方法，所述方法包括：

使样品与包含荧光素酶、D-荧光素和L-荧光素的组合物接触，其中所述组合物基本上不含三磷酸腺苷(ATP)，以形成反应测定混合物；以及

基于所述反应测定混合物产生的发光度，测定所述样品中ATP的存在或量；

其中所述组合物中D-荧光素与L-荧光素的浓度比为1:1至4:1，并且其中所述组合物在0℃至35℃的温度下储存至少1天后保留原始活性的50％。

15.根据权利要求14所述的方法，其中D-荧光素与L-荧光素的浓度比为2:1至4:1。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述样品包含：

(i)完整的细胞；或

(ii)产生或使用ATP的纯化的酶。