[发明专利]一种血源人凝血因子VIII生产工艺

说明书

本发明公开了一种血源人凝血因子VIII生产工艺。在进行S/D病毒灭活后进行两次离子交换层析，收集洗涤溶液，合并两次洗脱峰溶液后配制产品。通过对第一次离子交换层析洗涤液中FVIII的再次层析回收，有效降低了FVIII的生产损失。在第一次层析过程中，洗涤液中的FVIII含量通常占S/D灭活后溶液中FVIII的10％～30％。通过第二次层析，基本可实现第一次层析的洗涤溶液中FVIII的完全回收。

技术领域

本发明涉及血液制品技术领域，特别是涉及一种血源人凝血因子VIII生产工艺。

背景技术

人凝血因子VIII(Human Coagulation Factor VIII，FVIII)是人体内内源性凝血途径中的重要因子，其功能是作为凝血因子IXa的辅助因子，参与对凝血因子X的激活，进而促进人体内的凝血级联反应。FVIII缺乏会导致人体内的凝血机能障碍，称为甲型血友病。其主要原因是由于体内凝血因子VIII编码基因突变导致该凝血因子功能缺陷，进而导致凝血功能障碍。该症状呈X连锁隐性遗传，由女性传递，男性发病，发病率约为1/5000的男性，女性患者极为罕见。

目前，针对该适应症最有效的治疗方法是使用血源或重组FVIII制剂对病人体内的FVIII进行补充，以达到正常人水平，从而保证其生活的正常化。目前国内血源FVIII制剂因原料血浆采集量有限以及生产工艺回收率问题，产量极为有限，重组FVIII制剂因进口批签发政策和国内研发进度问题也不能满足临床需求。

山东泰邦生物制品有限公司申报的包含FVIII生产工艺的专利201110234266.9所描述的产品已经上市。且已报道的血源FVIII生产工艺中，如申请号为201410496187.9，201510879630.5，201610039010.5，201710655027.8的专利申请，其工艺均与文献报道大致相同，分为冷沉淀溶解，杂质去除，S/D灭活，离子交换层析，超滤配制，冻干干热。关于FVIII产品收率的研究文献，如刘晓等(刘晓等，离子交换层析法制备高纯度人凝血因子VIII的研究，中国新药杂志，2015,24(7)：760-764,799)对通用的血源FVIII产品的每步生产工艺进行了收率的详细的优化研究；其中报道了在优化条件下离子交换层析中FVIII最高损失率超过20％，同时冻干干热步骤的最优条件下，FVIII收率也会累计下降超过10％。可以看出在现有工艺流程的条件下，提高FVIII产品的收率能力是有限的。

发明内容

本发明针对上述存在的缺陷而提供一种血源人凝血因子VIII生产工艺，是基于专利201110234266.9所描述的FVIII产品生产工艺而提供一种由第一次层析洗涤液制备FVIII产品并与第一次层析洗脱峰溶液并线生产FVIII的方法。

本发明的一种血源人凝血因子VIII生产工艺技术方案为，在进行S/D病毒灭活后进行两次离子交换层析，合并两次洗脱峰溶液后配制产品。

具体为，在进行S/D病毒灭活后进行两次Toyopeal DEAE-650M离子交换层析，第一次Toyopeal DEAE-650M离子交换层析分别收集洗涤溶液，洗脱峰溶液。使用第一次Toyopeal DEAE-650M离子交换层析的洗涤溶液作为原料，经注射用水稀释至原体积的1.5倍～5倍，第二次经过Capto Q或Fractogel EMD TMAE离子交换层析，收集洗脱峰溶液。合并两次洗脱峰溶液后配制产品。

两次离子交换层析，其具体步骤如下：

第一次离子交换层析：

层析柱装填Toyopeal DEAE-650M离子交换凝胶。

上样S/D灭活后的溶液；

使用缓冲液洗涤层析柱，直至波长280nm的紫外吸收值恢复或者接近基线水平，根据波长280nm的紫外吸收值收集洗涤溶液；

最后用的缓冲液洗脱层析柱，根据波长280nm的紫外吸收值收集洗脱峰溶液；