[发明专利]一种应用于酵母细胞中HCP残留的去除方法有效
| 申请号： | 201911409587.0 | 申请日： | 2019-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN111018947B | 公开（公告）日： | 2023-02-28 |
| 发明（设计）人： | 李洋;张征立;李长征;李国庆;康涛 | 申请（专利权）人： | 江苏耀海生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/18 | 分类号： | C07K1/18;C07K1/20;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京哌智科创知识产权代理事务所(普通合伙) 11745 | 代理人： | 何浩 |
| 地址： | 225300 江苏省泰*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 应用于 酵母 细胞 hcp 残留 去除 方法 | ||
1.一种应用于酵母细胞中HCP残留的去除方法，其特征在于，该方法包括如下：
(1)对酵母细胞液进行阳离子交换层析，洗脱，收集洗脱峰，得洗脱样液；
(2)对步骤(1)所得洗脱样液进行疏水层析，洗脱，收集洗脱峰，得洗脱样液；
(3)对步骤(2)所得洗脱样液进行CHT层析，洗脱，收集流穿峰，得洗脱样液；
(4)对步骤(3)所得洗脱样液进行阳离子层析，洗脱，收集洗脱峰，即可；
该方法包括如下步骤：
(1)对酵母细胞液进行阳离子层析，先用平衡缓冲液平衡层析柱，上样阶段用平衡缓冲液继续冲洗2个柱体积，分别以2.8～3.6％，8.2～11.8％，23.8～27.3％，47.9～51.5％，100％梯度的洗脱缓冲液，以2.0mL/min流速洗脱，收集洗脱峰，检测于280nm波长，得洗脱样液；
所述平衡缓冲液：52mM醋酸钠-醋酸，pH4.2；
所述洗脱缓冲液：52mM醋酸钠-醋酸，1.5M氯化钠，pH4.2；
(2)对步骤(1)所得洗脱样液进行疏水层析，先用平衡缓冲液平衡层析柱，上样阶段，用平衡缓冲液继续冲洗2个柱体积，以0-100％的洗脱缓冲液洗进行线性洗脱，以2.0mL/min流速洗脱，收集洗脱峰，检测于280nm波长，得洗脱样液；
平衡缓冲液：21mM NaAc-HAc，1M(NH4)2SO4 pH5.5；
洗脱缓冲液：21mM NaAc-HAc，pH5.5；
(3)对步骤(2)所得洗脱样液进行CHT层析，先用平衡缓冲液平衡层析柱，上样阶段，用平衡缓冲液继续冲洗2个柱体积，以2.0mL/min流速用洗脱平衡液进行洗脱，收集流穿峰，检测于280nm波长，得洗脱样液；
所述平衡缓冲液：20mM PB缓冲液，pH7.0；
所述洗脱平衡液：400mM PB缓冲液，1.0M氯化钠，pH7.0；
(4)对步骤(3)所得洗脱样液进行阳离子交换层析，先用平衡缓冲液平衡层析柱，上样阶段，用平衡缓冲液继续冲洗2个柱体积，分别以2.1～4.8％，5.9～8.6％，9.3～12.7％，23.5～27.6％，100％的洗脱缓冲液，以2.0mL/min流速洗脱，收集洗脱峰，检测于280nm波长；
所述平衡缓冲液：50mM醋酸钠-醋酸，pH4.2；
所述洗脱平衡液：50mM醋酸钠-醋酸，1.5M氯化钠，pH4.2；
所述步骤(1)～(4)都采用AKTApure 150层析系统、所用层析柱均为BXP16/30；
所述步骤(1)中的层析柱填料：NanoSP 30L、Nuvia、HR-S中的任意一种；
所述步骤(2)中的层析柱填料：phenyl bestarose FF(HS)；
所述步骤(3)中的层析柱填料：CHT；
所述步骤(4)中的层析柱填料：SPBestrose HP。
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