[发明专利]一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法

权利要求书

1.一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以阿奇霉素-¹³C-d3为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的乙腈水溶液，混匀后加入5μL的1ng/μL的内标阿奇霉素-¹³C-d3溶液，混匀后加入1000μL的甲醇，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液50μL至装有1000μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比80：20：0.2混合得到的混合物；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中阿奇霉素和内标阿奇霉素-¹³C-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的阿奇霉素浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Synergi^TM 4um Polar-RP 柱规格为50×2mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积百分比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为6℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间3.5min；

质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为4500V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为30Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，阿奇霉素和阿奇霉素-¹³C-d3的去簇电压均为20eV；阿奇霉素和阿奇霉素-¹³C-d3的碰撞室入口电压均为10eV；阿奇霉素和阿奇霉素-¹³C-d3的碰撞电压均为40eV；阿奇霉素和阿奇霉素-¹³C-d3的碰撞室出口电压均为10eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z749.5→m/z591.4，其为阿奇霉素；和m/z753.5→m/z595.5，其为阿奇霉素-¹³C-d3。

2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：

3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以阿奇霉素和内标阿奇霉素-¹³C-d3的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的阿奇霉素的浓度。