[发明专利]一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为阿奇霉素的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为1～500ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中阿奇霉素的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法。

背景技术

阿奇霉素(Azithromycin)属第二代大环内酯类抗生素，由南斯拉夫Pliva公司在上世纪80年代末研发成功。阿奇霉素由于其耐受性较好，不良反应率较低，在临床上的应用非常广泛。

阿奇霉素作为一种半合成的十五元环内酯类抗生素，是红霉素化学结构经过修饰之后得到的一种广谱抗生素，除了对大部分细菌有抗菌作用外，对衣原体、支原体也有较好的活性。作用机制与红霉素相同，主要与细菌核糖体的50S亚单位结合，抑制依赖于RNA的蛋白合成。临床广泛用于化脓性链球菌引起的急性咽炎、急性扁桃体炎；敏感细菌引起的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作；肺炎链球菌、流感嗜血杆菌以及肺炎支原体所致的肺炎；沙眼衣原体及非多种耐药淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宫颈炎；敏感细菌引起的皮肤软组织感染。

目前，现有关于阿奇霉素测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。

为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中阿奇霉素浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以阿奇霉素-¹³C-d3为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的乙腈水溶液，混匀后加入5μL的1ng/μL的内标阿奇霉素-¹³C-d3溶液，混匀后加入1000μL的甲醇，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液50μL至装有1000μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比80：20：0.2混合得到的混合物；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中阿奇霉素和内标阿奇霉素-¹³C-d3的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的阿奇霉素浓度；

液相色谱测定条件为：色谱柱为Synergi^TM 4um Polar-RP柱规格为50×2mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积百分比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为6℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间3.5min；