[发明专利]一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法

权利要求书

1.一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，包括以下步骤：

1)从待测T细胞中分选和富集PD-1高表达T细胞；

2)通过微流控液滴技术制备单细胞转录组文库；

3)采用二代测序技术对转录组文库进行TCR定向测序。

2.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，其特征在于，还包括：通过物理性或酶消化分离方法从待测外周静脉血和/或肿瘤组织中得到待测T细胞。

3.根据权利要求2所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，其特征在于，所述待测外周静脉血和/或肿瘤组织均来自肿瘤患者。

4.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，其特征在于，步骤1)包括：通过荧光标记PD-1抗体对待测T细胞进行标记，再通过流式细胞分选进一步分离和富集。

5.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，其特征在于，步骤1)中，富集出PD-1高表达的T淋巴细胞亚群CD4⁺PD-1^高和CD8⁺PD-1^高细胞。

6.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，其特征在于，还包括：分析测序拿到的T细胞受体的组织以及其抗原互补区域CDR的序列。

7.根据权利要求6所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法，其特征在于，通过对CDR的生物信息学分析，以及对外周静脉血T细胞的T细胞受体和肿瘤侵润T细胞的T细胞受体进行对比，获得针对肿瘤特异性T细胞受体。