[发明专利]一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法在审
申请号: | 201911411842.5 | 申请日: | 2019-12-31 |
公开(公告)号: | CN111041078A | 公开(公告)日: | 2020-04-21 |
发明(设计)人: | 雷峰阳 | 申请(专利权)人: | 苏州安泰赫生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6869 | 分类号: | C12Q1/6869 |
代理公司: | 苏州中合知识产权代理事务所(普通合伙) 32266 | 代理人: | 刘召民 |
地址: | 215500 江苏省苏州市工业*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 pd 表达 细胞 受体 单细胞 方法 | ||
1.一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,包括以下步骤:
1)从待测T细胞中分选和富集PD-1高表达T细胞;
2)通过微流控液滴技术制备单细胞转录组文库;
3)采用二代测序技术对转录组文库进行TCR定向测序。
2.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,其特征在于,还包括:通过物理性或酶消化分离方法从待测外周静脉血和/或肿瘤组织中得到待测T细胞。
3.根据权利要求2所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,其特征在于,所述待测外周静脉血和/或肿瘤组织均来自肿瘤患者。
4.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,其特征在于,步骤1)包括:通过荧光标记PD-1抗体对待测T细胞进行标记,再通过流式细胞分选进一步分离和富集。
5.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,其特征在于,步骤1)中,富集出PD-1高表达的T淋巴细胞亚群CD4+PD-1高和CD8+PD-1高细胞。
6.根据权利要求1所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,其特征在于,还包括:分析测序拿到的T细胞受体的组织以及其抗原互补区域CDR的序列。
7.根据权利要求6所述的一种基于PD-1高表达T细胞的T细胞受体的单细胞测序方法,其特征在于,通过对CDR的生物信息学分析,以及对外周静脉血T细胞的T细胞受体和肿瘤侵润T细胞的T细胞受体进行对比,获得针对肿瘤特异性T细胞受体。
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