[发明专利]作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法

说明书

本发明涉及一种作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法，包括如下步骤：将全血放入离心机中将血小板与全血中的其他成分离心分离；然后在无菌条件下分离出所述血小板并收集，然后将血小板破裂；将破裂的血小板离心分离，并收集滤液进行无菌化处理，得到血小板裂解物；采用培养液培养牙齿的牙髓间充质细胞，并通过检测其各项实验室指标选择最适血小板裂解液浓度。本发明的作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法，无异源性物质，同时，多人份全血混合制备血小板裂解物可以避免出现批次间差异，使用本工艺获得的血小板裂解物培养细胞时，可以使细胞增殖速度更快，且成骨分化能力更强。

技术领域

本发明涉及一种作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法。

背景技术

现有的牙髓间充质细胞体外扩增技术均需在细胞培养基中加入动物血清，而动物血清却存在着很大的潜在风险，如人畜共患病、朊病毒感染等。血小板裂解物来源于健康供体或者血库，来源安全，并含有多种生长因子，在所培养细胞的后期使用中不但可以增加其安全性，并且可以促进牙髓间充质细胞的增殖与成骨分化。但是目前尚未有开发对健康供体或者血库的研究。

发明内容

本发明的一个目的在于提出一种作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法。

本发明的一种作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法，包括如下步骤：S101：将全血放入离心机中将血小板与所述全血中的其他成分离心分离；S102：然后在无菌条件下分离出所述血小板并收集，然后将所述血小板破裂；S103：将破裂的所述血小板采用离心机进行离心分离，并收集滤液进行无菌化处理，得到血小板裂解物；S104：采用血小板裂解物的质量浓度为5％～20％的DMEM培养液培养牙齿的牙髓间充质细胞，并通过检测其各项实验室指标选择最适血小板裂解液浓度。

本发明的作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法，无异源性物质，同时，多人份全血混合制备血小板裂解物可以避免出现批次间差异，使用本工艺获得的血小板裂解物培养细胞时，可以使细胞增殖速度更快，且成骨分化能力更强；从自体全血中提取血小板裂解物并保证其质量，在体外研究中已经验证其在牙髓间充质细胞体外扩增及分化中的促进作用。

另外，本发明上述的作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：

进一步地，在所述步骤S104中，所述牙齿采用拔除的废用健康智齿或矫正所拔除的健康正畸牙。

进一步地，在所述步骤S104中，所述各项实验室指标包括检测细胞增殖速度、活细胞比例和所培养的细胞与传统培养模式下的细胞成骨能力的对比。

进一步地，在所述步骤S101中，所述全血取源于健康人体，且至少取自两个人。

进一步地，在所述步骤S101中，所述离心分离时的旋转半径为5cm～7cm，转速为2500r/min～3000r/min，离心分离的时间为10min～15min。

进一步地，在所述步骤S103中，所述离心分离时的旋转半径为8cm～12cm，转速为2700r/min～3200r/min，离心分离的时间为8min～12min。

进一步地，在所述步骤S102中，将所述血小板进行破裂时，采用低温-高温冻融循环的方式，首先在-82℃～-78℃温度下冷冻10h～14h，然后在35℃～40℃温度下融化1.5h～2.5h。

进一步地，在所述步骤S102中，所述低温-高温冻融循环的方式反复进行三次。

本发明的另一个目的在于提出所述的方法制备的作为牙髓间充质细胞体外培养的自体血小板裂解液。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。