[发明专利]一种检测肺炎衣原体抗体间接ELISA检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测肺炎衣原体抗体间接ELISA检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括肺炎衣原体重组抗原ELISA包被酶标条、血清稀释板、稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标二抗结合物、洗涤液、TMB显色液和终止液。终止液为2 M浓硫酸。CP重组抗原的序列为SEQ ID NO.1。通过方阵优化最佳抗原包被浓度和血清稀释度、确定酶标二抗稀释度、确定封闭液种类和封闭时间、抗体孵育时间。本发明用于检测CP抗体具有特异性强、敏感性高、稳定性好和通量高等优点，可以很好的而检测人体血清中CP抗体，对临床诊断具有一定的指导意义。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是一种检测肺炎衣原体抗体间接ELISA检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

肺炎衣原体(Chlamydia pneumonia,CP)是一种全球比较常见的社区获得性肺炎的主要病原之一，幼儿和老年人是易感人群，四季均可发病，主要经由飞沫传染。临床上主要以呼吸道症状，咽痛、声嘶、流涕等，也可表现发烧、咳嗽。

CP感染通常是轻度的、自限性的疾病，由于其症状不典型，故常常被忽略或是漏诊。研究表明，CP感染与一些慢性疾病有关，例如，哮喘、中耳炎、结节性红斑、动脉粥样硬化及心内膜炎、冠心病等，CP感染还会导致脑血管和中枢神经系统受损，严重者会危及生命，引起广泛关注。

现阶段CP的检测方法主要有：细胞的分离培养、血清学检测、分子生物学方法和联合检测。

上述检测方法存在的问题有：

第一，CP是一种专性胞内寄生菌，分离培养周期长、成本高；

第二，PCR检测衣原体DNA，其特异性和敏感性高，但是对实验室环境有特殊要求，实验室需要配备高端设备和高级技术人员，而且PCR的假阳性率难以控制，一般实验室难以开展；

第三，血清学的检测方法由于其通量高、成本低、特异性强和灵敏度高等优点，广泛的应用于临床检测和流行病学调查。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测肺炎衣原体抗体间接ELISA检测试剂盒及其检测方法，解决现阶段检测成本高、灵敏度有限、特异性差、对检测环境要求高、培养时间长、PCR的假阳性率难以控制等技术问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明一方面提供一种检测肺炎衣原体抗体间接ELISA检测试剂盒，检测试剂盒包括肺炎衣原体重组抗原ELISA包被酶标条、血清稀释板、稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶标二抗结合物、洗涤液、 TMB显色液和终止液。

进一步，终止液为2M浓硫酸。

进一步，CP重组抗原的序列为SEQ ID NO.1。

进一步，抗原包被方法是：使用CBS碳酸盐缓冲溶液稀释蛋白质浓度至2μg/mL，100μL/孔，放于4℃包被12-18h。

进一步，稀释液和洗涤液都是含有Tween-20的磷酸盐缓冲液(10×)，使用去离子水稀释成1×即可直接使用。

进一步，阴性对照血清是临床上诊断未感染肺炎衣原体的人血清。

进一步，阳性对照血清是临床上确诊有肺炎衣原体的人血清。

本发明另一方面还提供使用上述检测肺炎衣原体抗体间接ELISA检测试剂盒的检测方法，

步骤一，一抗孵育：取出试剂，待恢复室温后，将阴阳性对照液和待检样品使用血清稀释板稀释所需的稀释倍数，转至抗原板，孵育；

步骤二，二抗孵育：使用PBST洗液洗涤后加入酶标二抗，孵育；

步骤三，显色：洗涤后加入显色液反应；

步骤四，终止：加入终止液，测定其吸光光度值。