[发明专利]测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液

权利要求书

1.一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法，其特征在于，所述方法中采用柳胺酚作为内标，所述方法包括以下步骤：

制备储备液：将马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素和柳胺酚分别溶于HPLC甲醇中，获得到马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液和柳胺酚储备液；

制备工作液：采用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液分别稀释，获得马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液；采用HPLC甲醇作为溶剂，将所述柳胺酚储备液稀释成柳胺酚工作液，所述柳胺酚工作液中柳胺酚的浓度为50ng/mL；

制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；

制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；

检测分析样品：在96孔板上做出多个样品标示，向各个样品孔内加入对应的样品；在96孔板上相应的样品中加入柳胺酚工作液或HPLC甲醇；对各个样品进行封板、涡旋离心，并分别提取上清液；对各上清液进行稀释，分别取样分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述空白血浆为比格犬血浆。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液中，马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于200～200000ng/mL之间。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质控样品中，所述马索亚内酯、五味子甲醇、五味子乙素的浓度分别介于10.0～7500ng/mL之间。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述校正标准品中，所述马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于10.0～10000ng/mL之间。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中，液相色谱参数如下：

色谱柱：Inertstain AQ-C18 2.1*50mm，5μm，柱温为35℃；

流动相：包括流动相A和流动相B，所述流动相A为：乙酸体积分数为0.1％的乙酸水溶液，所述流动相B为：乙醇和乙腈的体积比为70％：30％的乙醇乙腈；

质谱条件：采用电喷雾离子原，正离子检测，选择多反应监测工作方式进行一/二级质谱分析，质谱检测工作参数如下：马索亚内酯的母离子/特征子离子的检测离子对为169.2/123.2，五味子醇甲的母离子/特征子离子的检测离子对为433.1/415.1，五味子乙素的母离子/特征子离子的检测离子对为401.1/300.2，柳胺酚的母离子/特征子离子的检测离子对为230.2/121.2。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，流动相梯度洗脱条件为：第0.01～0.1min，所述流动相B的体积分数为52％；第1.5min，所述流动相B的体积分数为88％；第1.9min，所述流动相B的体积分数为95％；第2.3～2.8min，所述流动相B的体积分数为100％；第2.81～3.1min，所述流动相B的体积分数为20％；第3.11～3.60min，所述流动相B的体积分数为100％；第3.61～4.80min，所述流动相B的体积分数为52％。

8.一种内标工作液，其特征在于，采用以下方法制备：

S1：称取一定量的柳胺酚溶解于甲醇中，获得柳胺酚储备液；

S2：采用甲醇对所述柳胺酚储备液进行稀释，获得内标工作液，所述内标工作液中，柳胺酚的浓度为50ng/mL。

9.根据权利要求8所述的内标工作液，其特征在于，在S1和S2中，所述甲醇均为HPLC甲醇。

10.根据权利要求9所述的内标工作液，其特征在于，所述柳胺酚储备液中，所述柳胺酚的浓度为1.00mg/mL，在S2中，将10μL所述柳胺酚储备液溶于200000μL HPLC甲醇中，获得柳胺酚浓度为50ng/mL的内标工作液。