[发明专利]测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液

说明书

本发明公开了一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液。所述方法包括：制备储备液；将储备液稀释成马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液和柳胺酚工作液；制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；检测分析样品。本方法具有检测灵敏度高、准确性良好、检测快捷、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。

技术领域

本发明涉及了临床血药浓度监测控制技术领域，具体的是一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液。

背景技术

肝纤维化是肝病中的一种。人体患有肝纤维化后，容易出现疲乏无力、食欲减退等症状，可能还会出现慢性消化不良、出血等症状，这些症状会给人体造成很大伤害。

扶正化瘀片是常用的治疗肝纤维化的中成药之一，其主要成分包括：五味子醇甲(Schisandrin)、五味子乙素(γ-Schisandrin)、马索亚内酯(Massoia Lactone)、丹参素钠(Sodium Danshensu)、野黑樱苷(Prunasin)、苦杏仁苷(Amygdalin)、柚皮素(Naringenin)、槲皮素(Quercetin)、芦丁(Rutin)、商陆苷(Ombuoside)及其代谢产物商陆素(Ombuin)、槲皮苷(Quercitrin)、山奈酚(Kaempferol)、葵烯酸钠(Sodium 5-Hydroxy-2-Decenoic)。检测比格犬(Beagle犬)血浆中扶正化瘀片的毒代动力学特征，评估药物主要成分在比格犬体内的暴露水平，对于帮助了解药物在人体内的作用效果具有重要意义。因此，本领域技术人员持续致力于研究用于测定扶正化瘀片主要成分在血浆中浓度的HPLC-MS/MS方法。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明实施例提供了一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液，其具有检测方法方便快捷、检测灵敏度高、准确性高等优点。

本申请实施例公开了：一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法，所述方法中采用柳胺酚作为内标，所述方法包括以下步骤：

制备储备液：将马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素和柳胺酚分别溶于HPLC甲醇中，获得到马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液和柳胺酚储备液；

制备工作液：采用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液分别稀释，获得马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液；采用HPLC甲醇作为溶剂，将所述柳胺酚储备液稀释成柳胺酚工作液，所述柳胺酚工作液中柳胺酚的浓度为50ng/mL；

制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；

制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；

检测分析样品：在96孔板上做出多个样品标示，向各个样品孔内加入对应的样品；在96孔板上相应的样品中加入柳胺酚工作液或HPLC甲醇；对各个样品进行封板、涡旋离心，并分别提取上清液；对各上清液进行稀释，分别取样分析。

具体的，所述空白血浆为比格犬血浆。

具体的，所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液中，马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于200～200000ng/mL之间。

具体的，所述质控样品中，所述马索亚内酯、五味子甲醇、五味子乙素的浓度分别介于10.0～7500ng/mL之间。