[发明专利]一种结核杆菌耐药性检测试剂盒及结核杆菌耐药性检测方法

说明书

本发明提供了一种结核杆菌耐药性检测试剂盒及方法，所述试剂盒包含结核杆菌耐药性检测试剂，所述结核杆菌耐药性检测试剂包含针对结核杆菌耐药性基因的测序引物，所述结核杆菌耐药性基因包括rpoB、katG、inhA‑promoter、inhA‑structural、furA、embB、ubiA、pncA、rpsA、gyrA、gyrB、eis、rpsL、rrs、tlyA、rplC和rrl基因中的一种或多种。进一步地，所述试剂盒还含有结核杆菌核酸检测试剂：针对IS6110的引物对1、针对IS6110的引物对2和针对IS6110的探针引物。上述试剂盒可以快速地对样本中的结核杆菌核酸进行检测，进一步对阳性标本进行耐药性检测，具有很好的灵敏度、特异性和准确性，能同时对常见抗结核药物17种耐药基因的48个位点进行突变检测，及一个基因间隔区片段缺失检测，可以更准确更全面地指导结核病用药。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种结核杆菌耐药性检测试剂盒及结核杆菌耐药性检测方法。

背景技术

结核分枝杆菌，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。如果病人感染的结核分枝杆菌对一种或一种以上的抗结核药物产生了耐药性，即为耐药结核病。WHO 2008年报道显示，全球结核病总耐药率为20.0％，耐多药率为5.3％，估计全球耐多药结核病为50万例，其中，被WHO认定的27个耐药高负担国家占了病例总数的85％。国是耐药结核高负担国家之一，据世界卫生组织估计，约有1/4－1/5耐多药结核病人发生在中国，耐药结核病的流行情况较为严重，2007～2008年开展的全国结核病耐药性基线调查结果显示，我国肺结核患者中耐多药率为8.3％，据此估算，我国每年新发耐多药患者12万例，占全球每年新发总数的24.0％，位列全球第二位。

传统的结核病诊断从根本上依赖于抗酸杆菌(AFB)涂片显微镜和选择固体培养基上的分枝杆菌培养，但这些方法都存在局限性。首先，AFB涂片的敏感性低(30-40％)，其准确性往往受到限制。其次，虽然以培养为基础的方法具有很高的准确性，长期以来一直被认为是实验室结核病诊断的金标准，但分枝杆菌培养的周转时间长(3-8周)往往导致诊断延迟。分子检测的反向点杂交法敏感性低，操作复杂，结果不可靠。商业上可获得的实时聚合酶链反应(PCR)检测方法，如Abbott实时MTB检测法和GeneXpert MTB/RIF Ultra可提供及时和准确的结核病诊断但价格昂贵。然而，这些方法大都都是检测检核分枝杆菌，对于耐药结核来说GeneXpert MTB/RIF可以检测，但只能检测利福平这一种药物的一个耐药基因，导致患者如果是其他药物耐药或者利福平药物其他耐药基因耐药无法检测到。分子的反向点杂交法也可以检测，但目前只能检测四个药物(异烟肼，利福平，乙胺丁醇，链霉素)的5个耐药基因的十个位点，这四种药物以外的耐药基因仍然无法检测。

发明内容

基于此，本发明提供一种结核杆菌耐药性检测试剂盒及结核杆菌耐药性检测方法，所述结核杆菌耐药性检测试剂盒可以对结核杆菌核酸阳性标本进行耐药性检测，包括对常见一线二线抗结核药物17种耐药基因的48个位点进行突变检测，及一个基因间隔区片段缺失检测。进一步地，还可以快速地对样本中的结核杆菌核酸进行检测具有很好的灵敏度、特异性和准确性。

具体技术方案为：