[发明专利]一种灵芝的组培方法

权利要求书

1.一种灵芝的组培方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.取灵芝子实体，浸泡于超净台上的生物消毒液中进行消毒，浸泡时间为60-120秒，然后取出；所述生物消毒液包括以下原料：谷维素、壳聚糖、花生四烯酸、解淀粉芽孢杆菌、异硫氰酸酯、青蒿素、春雷霉素、虾青素和水；

b.用无菌手术刀切开消毒后的子实体，在菌柄和菌盖之间显露出的菌肉中切取米粒大小作为外植体，然后取外植体喷洒保鲜液，再密封以保持无菌状态，接着置于1-5℃下冷藏2-6小时，取出后再置于15-25℃下活化4-8小时，重复进行冷藏和活化2-4次，得激活外植体；所述保鲜液包括以下原料：玉米朊、叶绿素、虾青素、碧萝芷、谷维素、辣木籽提取物、玉米赤霉烯酮、5-羟基色胺、甘露低聚糖和甘油；

c.将激活外植体接种于母种培养基上，在20-30℃培养10-20天，使培养基长满菌丝体，得母种；培养期间每天采用波长为670-720nm的红光和波长为512-520nm的绿光交替照射，设置光照强度为5-25lx，光照时间为140-200分钟，其余时间为黑暗无光照条件，红光与绿光的交替时间为20-40分钟；所述母种培养基的制备方法为：取MS培养基加热使溶解，然后在培养基中加入青蒿精油、玉米素、萘乙酸、纳豆，搅拌均匀后冷却，经过培养后，接着加热使再次溶解，继续在培养基中加入亚硒硫酸钠、褪黑素、玉米赤霉烯酮，搅拌均匀后进行灭菌、冷却，得母种培养基；

d.将母种置于微波照射下试炼12-24小时，设置照射波长为4-10cm、照射功率密度为15-25mW/cm²、微波源与母种的距离为1-2m，得试炼种；

e.取试炼种接种至MS培养基上，在20-30℃下进行培养，使MS培养基上长满菌丝体，得栽培种，将栽培种接种于菌袋或段木上，按常规方法进行栽培出菇，即可采收。

2.根据权利要求1所述的一种灵芝的组培方法，其特征在于，步骤a中所述生物消毒液包括以下重量份比的原料：谷维素5-15份、壳聚糖12-24份、花生四烯酸10-20份、解淀粉芽孢杆菌0.01-0.05份、异硫氰酸酯0.03-0.07份、青蒿素0.01-0.04份、春雷霉素0.02-0.07份、虾青素0.08-0.14份和水100-200份。

3.根据权利要求2所述的一种灵芝的组培方法，其特征在于，所述生物消毒液的制备方法为：取谷维素、壳聚糖、花生四烯酸和解淀粉芽孢杆菌，加水搅拌均匀，在20-30℃下培养80-100小时，然后取出，加入异硫氰酸酯、青蒿素、春雷霉素、虾青素，搅拌均匀，接着采用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌，得生物消毒液。

4.根据权利要求1所述的一种灵芝的组培方法，其特征在于，步骤b中所述保鲜液包括以下重量份比的原料：玉米朊20-30份、叶绿素0.1-0.7份、虾青素0.5-1.7份、碧萝芷3-9份、谷维素2-8份、辣木籽提取物15-25份、玉米赤霉烯酮0.2-0.6份、5-羟基色胺0.04-0.1份、甘露低聚糖1-3份和甘油110-180份。

5.根据权利要求4所述的一种灵芝的组培方法，其特征在于，所述辣木籽提取物的制备方法为：取辣木籽粉碎后，加水湿润，使水分含量为21%-31%，然后置于闪爆器中进行高压蒸汽闪爆处理，设置闪爆器温度为70-90℃、压力为1-3MPa、保压时间为140-160秒、卸压时间为0.03-0.08秒、闪爆次数为2-4次，得闪爆粉，接着取闪爆粉按料液比g/ml为1:7-15加入水微波萃取65-95分钟，设置微波萃取的功率为700-1100w，随后过滤，收集滤液浓缩干燥，得辣木籽提取物。

6.根据权利要求4所述的一种灵芝的组培方法，其特征在于，所述保鲜液的制备方法为：取玉米朊、叶绿素、虾青素、碧萝芷混合均匀，然后加入20%-30%重量的甘油，置于高压均质机中进行均质，设置高压均质机温度为5-15℃、压力为30-50Mpa、循环次数为2-4次，得均质包合物，备用；取剩余甘油加热至55-75℃，加入谷维素、辣木籽提取物、玉米赤霉烯酮、5-羟基色胺和甘露低聚糖，搅拌均匀，然后冷却至室温，加入所述均质包合物，搅拌均匀，得保鲜液。

7.根据权利要求1所述的一种灵芝的组培方法，其特征在于，步骤c中所述母种培养基的制备方法为：取MS培养基加热使溶解，然后在每升培养基中加入青蒿精油10-20mg、15-25mg玉米素、4-10mg萘乙酸、5-15g纳豆，搅拌均匀后冷却，在20-30℃下培养72-94小时，接着加热使再次溶解，继续在每升培养基中加入亚硒硫酸钠0.1-0.5g、褪黑素4-10mg、玉米赤霉烯酮3-9mg，搅拌均匀后进行灭菌、冷却，得母种培养基。