[发明专利]一种灵芝的组培方法

说明书

本发明提供一种灵芝的组培方法,具体涉及食用菌组织培养技术领域。本发明突破性地以灵芝子实体组织中的多酚氧化酶为关注对象，在切取外植体前先用生物消毒液降低子实体中多酚氧化酶活性，防止其产生褐变，再于获取外植体后采用保鲜液冷藏和活化激活外植体中的纤维素酶和多酚酶，促进外植体接种后迅速生长出菌丝，并在培养期间采用特定波长的红光和绿光交替、间歇照射，之后用微波照射试炼，刺激菌丝体的生长和其中有效成分的富集。本发明的外植体成活率为72％以上，获得的菌丝体生长速度为8mm/d，总氨基酸含量为16％以上、多糖含量4％以上。

【技术领域】

本发明涉及食用菌组织培养技术领域，具体涉及一种灵芝的组培方法。

【背景技术】

灵芝在中国向来被视为草木菁英，有“瑞草”、“仙草”等美誉，在日本被称为万年茸，是一种珍贵的药(食)用菌。《神农本草经》指出：赤芝(即灵芝)“苦，平，无毒”，主治“胸中结、益心气，补中、增智慧、不忘”，“久食轻身不老，延年神仙”。《本草纲目》记载灵芝有“滋补强壮、延年益寿、利关节、治耳聋”等神奇功效，将其列为药中上品。

在自然界中，灵芝通过子实体产生孢子进行有性繁殖。当人们将灵芝进行引种驯化后，发现采用孢子进行育种的萌发率极低，由此人们发展出了用孢子或子实体组织细胞作为外植体经培养萌发形成的纯菌丝体的育种方法。目前，在灵芝的实体组织细胞培养时，极少关注其中酶的活性情况，只是按常规的组培方法进行组织分离和培养操作，如中国专利公开号为CN107750814A、名为一种野生灵芝菌种的培育方法的专利文献，公开了将灵芝菌肉组织依次从原种培育到栽培种培育的过程，该方法虽然能够获得菌丝作为菌种，但外植体成活率低、各阶段菌丝的生长速度也较低，且氨基酸和多糖成分含量低，直接造成子实体发育缓慢和有效成分含量低。

因此，为使人工繁育灵芝获得更大的成功、促进灵芝产业持续发展，有必要开发一种菌丝生长迅速、有效成分含量高的灵芝组培方法。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对灵芝现有组培方法中外植体成活率低、菌丝的生长速度较低，且氨基酸和多糖成分含量低的问题，提供一种灵芝的组培方法。本发明的外植体成活率为72％以上，获得的菌丝体生长速度为8mm/d，总氨基酸含量为16％以上、多糖含量4％以上。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种灵芝的组培方法，包括以下步骤：

a.取灵芝子实体，浸泡于超净台上的生物消毒液中进行消毒，浸泡时间为60-120秒，然后取出；

b.用无菌手术刀切开消毒后的子实体，在菌柄和菌盖之间显露出的菌肉中切取米粒大小作为外植体，然后取外植体喷洒保鲜液，再密封以保持无菌状态，接着置于1-5℃下冷藏2-6小时，取出后再置于15-25℃下活化4-8小时，重复进行冷藏和活化2-4次，得激活外植体；

c.将激活外植体接种于母种培养基上，在20-30℃培养10-20天，使培养基长满菌丝体，得母种；培养期间每天采用波长为670-720nm的红光和波长为512-520nm的绿光交替照射，设置光照强度为5-25lx，光照时间为140-200分钟，其余时间为黑暗无光照条件，红光与绿光的交替时间为20-40分钟；

d.将母种置于微波照射下试炼12-24小时，设置照射波长为4-10cm、照射功率密度为15-25mW/cm²、微波源与母种的距离为1-2m，得试炼种；

e.取试炼种接种至MS培养基上，在20-30℃下进行培养，使MS培养基上长满菌丝体，得栽培种，将栽培种接种于菌袋或段木上，按常规方法进行栽培出菇，即可采收。