[发明专利]一种糜蛋白酶的提取纯化方法

权利要求书

1.一种糜蛋白酶的提取纯化方法，其特征在于，所述方法具体为：

(1)将动物胰脏绞碎成浆后，加入硫酸溶液进行提取，然后进行过滤并收集滤液1；

(2)在所述滤液1中加入硫酸铵进行沉淀，然后进行过滤并收集滤液2；

(3)将所述滤液2进行超滤浓缩，得到浓缩液，在所述浓缩液中加入胰蛋白酶进行活化处理；

(4)将所述活化处理后的浓缩液上样至平衡处理后的疏水层析柱，进行洗脱处理并收集洗脱流出液，得馏分1；

(5)将所述馏分1进行超滤换盐后，上样至平衡处理后的亲和层析柱，进行洗脱处理并收集洗脱流出液，得馏分2；

(6)将所述馏分2进行超滤换盐后，冻干，得到糜蛋白酶成品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加入硫酸溶液进行提取，具体为：

所述硫酸溶液浓度为0.05-0.1mol/L，所述硫酸溶液使用量为每kg胰脏加入1-1.5L，并进行搅拌提取，所述搅拌提取时间为8-10小时。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)，具体为：

在所述滤液1中加入所述硫酸铵至饱和度为30-40％，静置6-8小时后进行过滤并收集所述滤液2。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述浓缩液中加入胰蛋白酶进行活化处理，具体为：

调节所述浓缩液pH为7.5-8.0，加入所述胰蛋白酶活化后，加等体积纯化水稀释。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(4)中：

所述疏水层析柱填料为ButylSepharose 4Fast Flow，所述平衡处理中使用的平衡液为0.02M PB+1.5M(NH₄)₂SO₄；所述洗脱处理中使用的洗脱液为0.02M PB+0.5M(NH₄)₂SO₄。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(5)中：

所述亲和层析柱填料为Capto Blue，所述平衡处理中使用的平衡液为0.2M Tris-Hcl；所述洗脱处理中使用的洗脱液为0.2M Tris-Hcl+1.5M KCl。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述洗脱处理并收集洗脱流出液，具体为：

用所述平衡液洗涤，至洗涤流出液280nm波长处吸光值A280不再下降，换用所述洗脱液洗脱，收集洗脱流出液，至所述洗脱流出液280nm波长处吸光值A280不再下降，停止收集。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述步骤(5)中：

所述馏分1超滤换盐所用换盐液为所述平衡液；

所述馏分1超滤换盐后调节pH及电导率与所述平衡液一致：

然后上样至所述亲和层析柱。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(6)中：

所述馏分2超滤换盐所用换盐液为0.01M乙酸铵溶液。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超滤使用的超滤膜为10KD超滤膜。