[发明专利]O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法

权利要求书

1.O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白，其特征在于，包括亲和标签、促溶标签、O型FMDV衣壳蛋白表位和铁蛋白片段，所述促溶标签位于亲和标签的C端，所述O型FMDV衣壳蛋白表位位于促溶标签的C端，所述铁蛋白片段位于O型FMDV衣壳蛋白表位的C端，亲和标签为EW29标签，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，促溶标签的氨基酸序列如SEQ ID NO.2～9所示；该O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白可自组装形成铁蛋白包封O型FMDV衣壳蛋白的蛋白笼纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白，其特征在于，所述O型FMDV衣壳蛋白表位的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述铁蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。

3.根据权利要求1所述的O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白，其特征在于，表达所述EW29标签的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，表达所述促溶标签的核苷酸序列如SEQ IDNO.13～20所示。

4.根据权利要求2所述的O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白，其特征在于，表达所述O型FMDV衣壳蛋白表位的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示；表达所述铁蛋白片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示。

5.权利要求1～4任一项所述的O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白自组装形成的蛋白笼纳米颗粒。

6.权利要求5所述的蛋白笼纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将O型FMDV衣壳蛋白的核苷酸序列和铁蛋白片段的核苷酸序列串联，合成O型FMDV衣壳蛋白表位-铁蛋白片段；

步骤2：将O型FMDV衣壳蛋白表位-铁蛋白片段与促溶标签相连，得到促溶标签/ O型FMDV衣壳蛋白表位-铁蛋白片段，再将半乳糖结合凝集素EW29作为亲和标签与促溶标签/ O型FMDV衣壳蛋白表位-铁蛋白片段进行串联，形成重组序列，将重组序列连接至表达载体，构建重组载体；

步骤3：将重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，经过诱导表达和亲和层析纯化，得到目的蛋白O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白；纯化的目的蛋白进行自组装形成蛋白笼纳米颗粒。

7.一种重组载体，其特征在于，所述的重组载体包含有如权利要求3～4任一项所述的核苷酸序列。

8.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含有权利要求7所述的重组载体。

9.权利要求1～4所述的O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白、权利要求5所述的O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白自组装形成的蛋白笼纳米颗粒、权利要求6所述的笼纳米颗粒的制备方法在制备O型FMDV衣壳蛋白疫苗中的应用。