[发明专利]一种检测人线粒体ATP6基因8993位点基因型的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测人线粒体ATP6基因8993位点基因型的试剂盒，其特征在于：包括用于扩增线粒体ATP6基因8993位点的PCR引物和Taqman-MGB探针；

所述PCR引物包括：上游引物F：5′-GTTATTATCGAAACCATCAGCCT-3′；

下游引物R：5′-AGTAGGTGGCCTGCAGTAATGT-3′；

所述探针包括：Taqman-MGB探针PT:5′VIC-CAATAGCCCGGGCC-MGB-3′；

Taqman-MGB探针PG:5′FAM-CAATAGCCCTGGCC-MGB-3′。

2.根据权利要求1所述的检测线粒体8993位点基因型的试剂盒，其特征在于：还包括PCR预混液，该PCR预混液中含有PCR缓冲液、Taq DNA聚合酶、MgCl₂和dNTPs。

3.根据权利要求1所述的检测线粒体8993位点基因型的试剂盒，其特征在于：包含阳性对照品，该阳性对照品包括线粒体ATP6基因8993位点TT型质粒、线粒体ATP6基因8993位点GG型质粒。

4.一种检测线粒体8993位点基因型的方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：提取待测样品DNA；

步骤2：在PCR反应管中加入PCR预混液、引物、探针、无菌的超纯水和步骤1提取的模板DNA，得到反应体系；同时建立TT型对照管、GG型对照管、TG型对照管和空白对照管；所述TT型对照管中用线粒体ATP6基因8993位点TT型质粒替代步骤1提取的模板DNA；所述GG型对照管中用线粒体ATP6基因8993位点GG型质粒替代步骤1提取的模板DNA；所述TG型对照管中用线粒体ATP6基因8993位点TT型质粒和线粒体ATP6基因8993位点GG型质粒的混合物替代步骤1提取的模板DNA；所述空白对照管用无菌的超纯水替代步骤1提取的模板DNA；

所述PCR引物包括：上游引物F：5′-GTTATTATCGAAACCATCAGCCT-3′；

下游引物R：5′-AGTAGGTGGCCTGCAGTAATGT-3′；

所述探针包括：Taqman-MGB探针PT:5′VIC-CAATAGCCCGGGCC-MGB-3′；

Taqman-MGB探针PG:5′FAM-CAATAGCCCTGGCC-MGB-3′；

步骤3：将反应体系混合好后，进行荧光PCR扩增；

步骤4：根据FAM通道和HEX通道的扩增情况来进行结果判定，仅FAM通道有扩增S型曲线，判断该样品为TT型，仅VIC通道有扩增S型曲线，判断该样品为GG型，FAM和VIC通道均有S型曲线则判断为TG型。

5.根据权利要求4所述的检测线粒体8993位点基因型的方法，其特征在于：所述荧光PCR扩增条件：95℃/5min，95℃/15sec，60℃/1min，其中95℃/15sec至60℃/1min过程进行40个循环。

6.根据权利要求4所述的检测线粒体8993位点基因型的方法，其特征在于：所述PCR预混液，该PCR预混液中含有PCR缓冲液、Taq DNA聚合酶、MgCl₂和dNTPs。

7.根据权利要求4所述的检测线粒体8993位点基因型的方法，其特征在于：线粒体ATP6基因8993位点TT型质粒和线粒体ATP6基因8993位点GG型质粒按照1：1的质量比例构成的混合物替代步骤1提取的模板DNA。