[发明专利]一种过氧化物酶的提取与纯化方法

权利要求书

1.一种过氧化物酶的提取与纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

将五爪金龙破碎后，加入提取液进行提取后进行超滤浓缩，得到待纯化的浓缩液后采用有机溶剂沉淀分离法或/和无机盐沉淀分离法进行提纯，进行第一离心，取沉淀物溶于水并除去残留的有机溶剂或/和无机盐和不溶物后得到RZ1.0的过氧化物酶的溶液。

2.根据权利要求1所述的提取与纯化方法，其特征在于，所述五爪金龙为五爪金龙的任意部分或任意部分的组合。

3.根据权利要求1所述的提取与纯化方法，其特征在于，所述提取液的溶质包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、锌盐和镁盐中的一种或多种；

所述提取液的质量浓度为0～10%；

所述超滤浓缩采用分子量为1000～40000的中空纤维超滤柱。

4.根据权利要求1所述的提取与纯化方法，其特征在于，所述五爪金龙与所述提取液的质量体积比为1g：（0.1～30）ml。

5.一种过氧化物酶的提取与纯化方法，其特征在于，将权利要求1中所述第一离心得到的沉淀物溶于水或将权利要求1中所述RZ1.0的过氧化物酶的溶液加水稀释，采用有机溶剂沉淀分离法或/和无机盐沉淀分离法进行提纯，进行第二离心，取所述第二离心得到的沉淀物溶于水并除去残留的有机溶剂或/和无机盐和不溶物后得到RZ为1.0~2.0的过氧化物酶的溶液。

6.一种过氧化物酶的提取与纯化方法，其特征在于，将权利要求5中所述第二离心得到的沉淀物溶于水或权利要求5中所述的RZ为1.0~2.0的过氧化物酶的溶液加水稀释，采用有机溶剂沉淀分离法或/和无机盐沉淀分离法进行提纯，进行第三离心，取所述第三离心得到的沉淀物溶于水并除去残留的有机溶剂或/和无机盐和不溶物后得到RZ为2.0~3.0的过氧化物酶的溶液。

7.一种过氧化物酶的提取与纯化方法，其特征在于，将权利要求6中所述第三离心得到的沉淀物溶于水或权利要求6中所述的RZ为2.0~3.0的过氧化物酶的溶液加水稀释，加入锌盐和有机溶剂后进行第四离心，取上清液加入所述有机溶剂进行第五离心，取所述第五离心得到的沉淀物溶于水并除去残留的有机溶剂或/和无机盐和不溶物后得到RZ≥3.0的过氧化物酶的溶液。

8.根据权利要求1~7任意一项所述的提取与纯化方法，其特征在于，所述有机溶剂沉淀分离法中的有机溶剂为乙醇、丙酮、甲醇和异丙酮中的一种或多种；

所述有机溶剂的温度为0～-20℃；

待纯化的浓缩液或待纯化的过氧化物酶溶液与所述有机溶剂的体积比为1：（0.5～3.0）。

9.根据权利要求1~7任意一项所述的提取与纯化方法，其特征在于，所述无机盐沉淀分离法中的无机盐为(NH₄)₂SO₄、Na₂SO₄、MgSO₄和Na₂HPO₄ 中的一种或多种；

待纯化的浓缩液或待纯化的过氧化物酶溶液与所述无机盐的质量体积比为1升：（150～500）克；所述有机溶剂沉淀分离法或/和无机盐沉淀分离法采用的离心为冷冻离心；

所述冷冻离心速率为1000～20000 rpm，时间为5～80 min，温度为-10~10℃。