[发明专利]一种过氧化物酶的提取与纯化方法

说明书

本发明涉及过氧化物酶提取与纯化技术领域，尤其涉及一种过氧化物酶的提取与纯化方法。本发明公开了一种过氧化物酶的提取与纯化方法，本发明首次以五爪金龙为提取过氧化物酶的原料，经提取与浓缩，再用有机溶剂沉淀分离法或/和无机盐沉淀分离法提纯得到RZ1.0、1.0～2.0、2.0～3.0、≥3.0不同等级的过氧化物酶的溶液，检测RZ值及活力合格后冷冻干燥得到RZ1.0、1.0～2.0、2.0～3.0、≥3.0不同等级的过氧化物酶冻干粉。本发明的过氧化物酶活力高，且较市场上的辣根过氧化物酶的热稳定性和pH稳定性好。

技术领域

本发明涉及过氧化物酶提取与纯化技术领域，尤其涉及一种过氧化物酶的提取与纯化方法。

背景技术

过氧化物酶(Peroxidase，简称POD)目前主要用于临床诊断试剂、酶联免疫诊断试剂的生产及生化实验等，目前生产上主要是从辣根中提取。

五爪金龙(学名：Ipomoea cairica(L.)Sweet)在自然界分布广泛，取材容易，而且该物种是外来入侵有害物种，蔓生，常常攀附并覆盖于其它植物体上，生长特别旺盛，影响、危害甚至破坏被攀附植物体的正常生长发育，破坏生态环境和危害其它作物生长。清除五爪金龙并用来提取过氧化物酶有利于生态保护，利于环保，利于农林业生产，产生良好的生态效益和经济效益，化害为宝，一举两得。目前还未有从五爪金龙中提取过氧化物酶的相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种过氧化物酶的提取与纯化方法，本发明首次以五爪金龙为提取过氧化物酶的原料，提取、纯化得到的过氧化物酶的活力高，且热稳定性和pH稳定性好。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种过氧化物酶的提取与纯化方法，包括以下步骤：

将五爪金龙破碎后，加入提取液进行提取后进行超滤浓缩，得到待纯化的浓缩液后采用有机溶剂沉淀分离法或/和无机盐沉淀分离法进行提纯，进行第一离心，取沉淀物溶于水并除去残留的所述有机溶剂或/和无机盐和不溶物后得到RZ1.0的过氧化物酶溶液。

本发明中，所述五爪金龙为五爪金龙的任意部分或任意部分的组合，包括但不限于五爪金龙的全株或根、茎、干、枝、茎枝、蔓、叶、花、果和种子中的一种或多种，优选为新鲜的。

本发明五爪金龙破碎前，还包括：五爪金龙的前处理；所述前处理具体为：将采集的新鲜五爪金龙植物体剔除杂质和枯枝；

所述破碎优选在自然空气或水中切割、压榨或碾磨，更优选在自然空气或水中进行切割成2cm以下的碎片；

所述提取液的溶质包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、锌盐和镁盐中的一种或多种，优选为NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂、K₂SO₄、MgSO₄、ZnSO₄、KH₂PO₄、Na₂HPO₄、Ca(NO₃)₂和Mg(NO₃)₂中的一种或多种；

所述提取液的质量浓度为0～10％，优选为0.5～5％；

所述提取具体为：采用1000～2000rpm打浆提取1min～30min，优选3～10min后进行离心；所述离心优选采用三足离心机套布袋离心，进行液渣分离后，收集滤液，得到的滤渣重复所述提取的操作1～2次，合并滤液；所述打浆为水中切割、压榨或碾磨，优选水中切割。

将所述滤液进行离心，除去悬浮状的杂质后，得到澄清液；所述离心使用的离心机优选为管式离心机。