[发明专利]测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法

权利要求书

1.一种HPLC-MS/MS法测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法，其特征在于，

PHLC-MS/MS分析测定过程的工作条件

(1)、PHLC条件：

色谱柱：InertStain AQ-C18(2.1mm x 50mm,5.0μm),SHIMADZU；

柱温：35℃；

流动相A：0.1％乙酸-水溶液；

流动相B：甲醇-乙腈溶液(7/3，v/v)；

进样体积：3.00μL；

运行时间：4.80min；

保留时间：Sodium Danshensu，大约1.68min；Prunasin，大约1.82min；Osalmide，大约2.04min；

(2)、质谱条件：

质谱仪：AB SCIEX API5000LC/MS/MS system；

离子源：ESI电喷雾电离；

离子化模式：Negative；

涡旋离子喷雾温度：550℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对Sodium Danshensu、Prunasin和Osalmide各取1.00mg/mL，并且分别溶于甲醇中，配置得到Sodium Danshensu储备液、Prunasin储备液和Osalmide储备液，≤-15℃密闭，遮光保存，其中Osalmide作为内标；

将所述Sodium Danshensu储备液和所述Prunasin储备液分别用甲醇溶液稀释成浓度为2*10⁵、1.6*10⁵ng/mL的校正标示样品工作液；将所述Sodium Danshensu和所述Prunasin等浓度混合，再用甲醇溶液稀释成浓度为4*10⁴、1.6*10⁴、1600、400、200ng/mL的校正标示样品工作液；

将所述Sodium Danshensu储备液和所述Prunasin储备液分别用甲醇溶液稀释成浓度为1.5*10⁵、1.0*10⁵ng/mL的质控工作液；将所述Sodium Danshensu和所述Prunasin混合再用甲醇溶液稀释成浓度为6*10⁴、600、200ng/mL的质控工作液；

将所述Osalmide储备液用甲醇溶液稀释成浓度为1*10⁴、50ng/mL的内标工作液；

将所述校正标示样品工作液用空白基质稀释成浓度为1*10⁴、8000、2000、800、80、20、10ng/mL的所述校正标示样，所述空白基质为不含分析物与内标的犬血浆，在本实施例中指不含Sodium Danshensu、Prunasin和Osalmide；

将所述质控工作液用所述空白基质稀释成浓度为7500、5000、300、30、10ng/mL的所述质控样品；

(2)样品处理：取等体积的所述校正标示样和所述质控样品，分别加入270μL的50ng/mL所述内标工作液，封板后涡旋混匀离心，离心后取上清液150μL至所述96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液。然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL在高效液相质谱联用仪(HPLC-MS/MS)上进样分析；

(3)标准曲线的制作：以Y＝aX+b制作标准曲线，X为分析物浓度，Y为色谱峰面积比；

(4)定量分析：根据步骤(2)对待测样品进行处理，并按照步骤(3)所得所述标准曲线计算得到所述待测样品中的Sodium Danshensu、Prunasin的浓度。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的离心条件为：10℃，4000rpm，离心10min。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括对空白(BK)样品的处理：吸取30μL的空白基质，加入270μL的甲醇溶液，封板后涡旋混匀，在10℃，4000rpm条件下离心10min，离心后取上清液150μL至所述96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液，然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL进行分析。