[发明专利]测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC‑MS/MS法测定犬血浆中Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法，PHLC‑MS/MS分析测定过程的工作条件包括PHLC和色谱条件，通过色谱柱、溶解液、流动相、保留时间等工艺条件的优化，使得整个测试过程更加可行，测量结果增加准确，减少了残留，提高了准确度以及回收率高，减小了基质效应以及干扰性。

技术领域

本发明涉及了生物分析领域，尤其涉及一种HPLC-MS/MS法测定犬血浆中SodiumDanshensu和Prunasin的浓度的方法。

背景技术

肝纤维化是肝病中的一种。人体患有肝纤维化后，容易出现疲乏无力、食欲减退等症状， 可能还会出现慢性消化不良、出血等症状，这些症状会给人体造成很大伤害。

扶正化瘀片是常用的治疗肝纤维化的中成药之一，其主要成分包括：五味子醇甲(Schisandrin)、五味子乙素(γ-Schisandrin)、马索亚内酯(Massoia Lactone)、丹参 素钠(Sodium Danshensu)、野黑樱苷(Prunasin)、苦杏仁苷(Amygdalin)、柚皮素(Naringenin)、槲皮素(Quercetin)、芦丁(Rutin)、商陆苷(Ombuoside)及其代谢产物 商陆素(Ombuin)、槲皮苷(Quercitrin)、山奈酚(Kaempferol)、葵烯酸钠(Sodium 5-Hydroxy-2-Decenoic)。检测比格犬(Beagle犬)血浆中扶正化瘀片的毒代动力学特征， 评估药物主要成分在比格犬体内的暴露水平，对于帮助了解药物在人体内的作用效果具有重 要意义。因此，本领域技术人员持续致力于研究测定血浆中扶正化瘀片主要成分浓度的 HPLC-MS/MS方法。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明实施例提供了一种HPLC-MS/MS法测定犬血浆中 Sodium Danshensu和Prunasin的浓度的方法，PHLC-MS/MS分析测定过程的工作条件：

(1)、PHLC条件：

色谱柱：InertStain AQ-C18(2.1mm x 50mm,5.0μm),SHIMADZU；

柱温：35℃；

流动相A：0.1％乙酸-水溶液；

流动相B：甲醇-乙腈溶液(7/3，v/v)；

进样体积：3.00μL；

运行时间：4.80min；

保留时间：Sodium Danshensu，大约1.68min；Prunasin，大约1.82min；Osalmide，大约2.04min；

(3)、质谱条件：

质谱仪：AB SCIEX API5000LC/MS/MS system；

离子源：ESI电喷雾电离；

离子化模式：Negative；

涡旋离子喷雾温度：550℃。

进一步地，包括如下步骤：

(1)对Sodium Danshensu、Prunasin和Osalmide各取1.00mg/mL，并且分别溶于甲醇 中，配置得到Sodium Danshensu储备液、Prunasin储备液和Osalmide储备液，≤-15℃密闭，遮光保存，其中Osalmide作为内标；