[发明专利]一种女性脂肪组织用的冻存液及其制备方法和冻存方法

说明书

本发明公开了一种女性脂肪组织冻存液，由以下重量份物质组成：5~15份二甲基亚砜、5~20份海藻糖、2~8份雌二醇、65~80份DMEM高糖培养基。本发明所述的组织冻存液最大程度地降低了单纯使用DMSO和基础培养基所引起的毒性，并保证了良好的冻存效果，雌二醇能够减少脂肪组织冻存中的冻存损伤，提升细胞活性，提高冻存效果，雌二醇对于脂肪组织活率具有很大的提升作用，在测试中分别测定原组织、冻存一个月、三个月、六个月以及一年后的平均细胞活率分别为99.57%、96.24%、95.78%、92.33%、90.15%，复苏后的组织在清除冻存液后可以直接应用于临床移植，在美容外科方面具有重要价值。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种女性脂肪组织用的冻存液及其制备方法和冻存方法。

背景技术

自体脂肪美容已越来越成为美容外科的一种美容方式，自体脂肪美容指的是通过负压吸引的方法把身体某一部位多余的脂肪给吸出来，然后将其填充至身体的其他部位，以达到特定效果。自体脂肪来源广泛，可以一次抽脂、多次使用，而且能减轻客户再次抽脂带来的痛苦和经济负担，抽取出来的多余脂肪可以利用低温冷冻技术将其放置于超低温冰箱中保存，需要的时候再进行复苏用于美容外科手术，所以体外进行组织的冻存就变得极其重要。

但是当前该冻存技术的配方主要为二甲基亚砜（DMSO）和基础培养液，DMSO是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性，DMSO也是一种毒性物质，它作为抗冻剂的同时也会对脂肪组织产生毒性作用，致使移植脂肪组织时出现细胞成活率低、坏死与吸收率低、感染等问题。海藻糖是一种非还原性糖，自身性质非常稳定，并对多种生物活性物质具有很好地保护作用，其中也包括脂肪等新鲜组织，海藻糖可以很好地缓和DMSO带来的毒理性影响。本发明可通过检测组织形态及组织中干细胞活率来确定冻存效果，冻存效果好细胞活率高，反之。为了获得最佳的冻存效果，开展有效的冻存方法和探求最优冻存液配方是本领域的迫切需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种女性脂肪组织用的冻存液及其制备方法和冻存方法，本发明所述的冻存液具有良好的冻存效果，冻存后细胞活率高。

本发明解决其技术问题采用以下技术方案：

一种女性脂肪组织冻存液，由以下重量份物质组成：5~15份二甲基亚砜、5~20份海藻糖、2~8份雌二醇、65~80份DMEM高糖培养基。

作为一种优选方案，所述的女性脂肪组织冻存液由以下重量份物质组成：8~12份二甲基亚砜、10~15份海藻糖、3~7份雌二醇、70~75份DMEM高糖培养基

作为一种优选方案，所述的女性脂肪组织冻存液由以下重量份物质组成：10份二甲基亚砜、12.5份海藻糖、5份雌二醇、72.5份DMEM高糖培养基。

作为一种优选方案，所述的女性脂肪组织冻存液由以下重量份物质组成：5份二甲基亚砜、10份海藻糖、5份雌二醇、80份DMEM培养基。

本发明还提供了一种女性脂肪组织冻存液的制备方法，包含以下步骤：

（1）将海藻糖溶解于DMEM培养基，过滤；

（2）加入雌二醇溶解完全加入到无菌容器中；

（3）用移液管加入二甲基亚砜摇匀即可，将冻存液置于0~6℃冰箱保存。

作为一种优选方案，所述过滤用细菌过滤器过滤。

本发明还提供了一种女性脂肪组织冻存方法，包括以下步骤：

（1）将脂肪组织样本无菌处理后置于40~60ml离心管中；

（2）用生理盐水对脂肪组织进行清洗后离心，使用20~30ml移液管将离心管下层生理盐水清洗液吸弃2~4次；