[发明专利]一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂、试剂盒及结核分枝杆菌的核酸扩增方法

权利要求书

1.一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂，其特征在于，所述处理试剂包括消化液、Tris-HCl溶液和裂解液；所述消化液为含有以下浓度组分的水溶液：二硫苏糖醇13-14g/L；氯化钠100-105g/L；氯化钾2-3g/L；磷酸氢二钠14-15.5g/L；磷酸二氢钾2-3g/L；所述Tris-HCl溶液的浓度为0.08-0.12mol/L；所述裂解液为含有以下浓度组分的水溶液：NaOH 0.08-0.15w/v％；SDS 0.02-0.03w/v％。

2.根据权利要求1所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂，其特征在于，所述消化液为含有以下浓度组分的水溶液：二硫苏糖醇13.33g/L；氯化钠104g/L；氯化钾2.67g/L；磷酸氢二钠14.93g/L；磷酸二氢钾2.67g/L。

3.根据权利要求1所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂，其特征在于，所述Tris-HCl溶液的浓度为0.1±0.01mol/L。

4.根据权利要求1所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂，其特征在于，所述裂解液为含有以下浓度组分的水溶液：NaOH 0.1w/v％；SDS 0.025w/v％。

5.一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向痰液样本中加入权利要求1或2所述的消化液，震荡混匀，然后于60-70℃孵育10-15分钟；

(2)将步骤(1)获得的混合液于13200g±50g离心8-15分钟，弃上清；

(3)向步骤(2)获得的沉淀中加入权利要求1或3所述的Tris-HCl溶液，震荡混匀，然后于13200g±50g离心8-15分钟，弃上清；

(4)向步骤(3)获得的沉淀中加入权利要求1或4所述的裂解液，然后于60-70℃孵育45-60分钟；

(5)向步骤(4)获得的混合液中加入权利要求1或3所述的Tris-HCl溶液，混匀，得到DNA溶液。

6.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法，其特征在于，所述痰液样本、消化液和裂解液的体积比为1：(0.1-0.3)：(0.1-0.2)；优选地，所述痰液样本、消化液和裂解液的体积比为1：0.1：0.1。

7.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中于65℃孵育10分钟。

8.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(2)中于13200g离心10分钟；所述步骤(3)中于13200g离心10分钟。

9.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法，其特征在于，所述步骤(4)中于65℃孵育45分钟。

10.一种检测结核分枝杆菌核酸的试剂盒，其特征在于，包含以下组分：权利要求1-4任一项所述的检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂；针对IS6110的引物对1；针对IS6110的引物对2；针对IS6110的探针引物；质控模板；针对质控模板的探针引物；

所述针对IS6110的引物对1包括序列如SEQ ID NO.1所示的IS6110-FW1和SEQ ID NO.2所示的IS6110-RV1；针对IS6110的引物对2包括序列如SEQ ID NO.3所示的IS6110-FW2和SEQ ID NO.4所示的IS6110-RV2；针对IS6110的探针引物序列如SEQ ID NO.5所示，探针引物的5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有猝灭基团；

所述质控模板含有小鼠RAB3A癌基因片段和IS6110引物对2结合区域；所述质控模板序列如SEQ ID NO.6所示；针对质控模板的探针引物序列如SEQ ID NO.7所示，探针引物的5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有猝灭基团，且所述荧光基团和猝灭基团与针对IS6110的探针引物的荧光基团和猝灭基团不相同。