[发明专利]一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂、试剂盒及结核分枝杆菌的核酸扩增方法

说明书

本发明提供了一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂、试剂盒及结核分枝杆菌的核酸扩增方法，所述样本处理试剂包括消化液、Tris‑HCl溶液和裂解液；所述消化液为含有以下浓度组分的水溶液：二硫苏糖醇13‑14g/L；氯化钠100‑105g/L；氯化钾2‑3g/L；磷酸氢二钠14‑15.5g/L；磷酸二氢钾2‑3g/L；所述裂解液为含有以下浓度组分的水溶液：NaOH 0.08‑0.15w/v％；SDS 0.02‑0.03w/v％。所述检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂可以更快捷更有效地从痰液样本中提取结核分枝杆菌DNA，有效去除人源DNA的干扰，且在处理过程中完全灭活了结核分枝杆菌，有效的降低了人员感染的风险，更加安全高效。所述检测结核分枝杆菌核酸的试剂盒具有很好的灵敏度、特异性和准确性，可以实现结核分枝杆菌核酸的快速检测。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂、试剂盒及结核分枝杆菌的核酸扩增方法。

背景技术

结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTBC)引起的，几十年来一直是一个全球性的公共卫生挑战。据估计，2016年全球新增结核病病例1040万例，死亡人数170万人。传统的结核病诊断从根本上依赖于抗酸杆菌(AFB)涂片显微镜和选择固体培养基上的分枝杆菌培养，但这些方法都存在局限性。首先，AFB涂片的敏感性低(30-40％)，其准确性往往受到限制。其次，虽然以培养为基础的方法具有很高的准确性，长期以来一直被认为是实验室结核病诊断的金标准，但分枝杆菌培养的周转时间长(3-8周)往往导致诊断延迟。

商业上可获得的实时聚合酶链反应(PCR)检测方法，如Abbott实时MTB检测法和GeneXpert MTB/RIF Ultra可提供及时和准确的结核病诊断。然而，这些商业检测仍然过于昂贵，特别对于大多数结核病负担较高发展中国家而言无法常规使用。

发明内容

基于此，本发明提供一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂、试剂盒及结核分枝杆菌的核酸扩增方法。所述检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂可以更快捷地从痰液样本中提取结核分枝杆菌及其DNA，有效去除人源DNA的干扰，且可以完全灭活结核分枝杆菌，更加安全高效。

具体技术方案为：

一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理试剂，所述处理试剂包括消化液、Tris-HCl溶液和裂解液；所述消化液为含有以下浓度组分的水溶液：二硫苏糖醇13-14g/L；氯化钠100-105g/L；氯化钾2-3g/L；磷酸氢二钠14-15.5g/L；磷酸二氢钾2-3g/L；所述Tris-HCl溶液的浓度为0.08-0.12mol/L；所述裂解液为含有以下浓度组分的水溶液：NaOH 0.08-0.15w/v％；SDS 0.02-0.03w/v％。

在其中一些实施例中，所述消化液的pH值为7.2-7.6。

在其中一些实施例中，优选所述消化液为含有以下浓度组分的水溶液：二硫苏糖醇13.33g/L；氯化钠104g/L；氯化钾2.67g/L；磷酸氢二钠14.93g/L；磷酸二氢钾2.67g/L。

在其中一些实施例中，所述Tris-HCl溶液的浓度为0.1±0.01mol/L。

在其中一些实施例中，优选所述裂解液为含有以下浓度组分的水溶液：NaOH0.1w/v％；SDS 0.025w/v％。

本发明还提供了一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法。

具体技术方案为：

一种检测结核分枝杆菌核酸的样本处理方法，包括以下步骤：

(1)向痰液样本中加入上述消化液，震荡混匀，然后于60-70℃孵育10-15分钟；

(2)将步骤(1)获得的混合液于13200g±50g离心8-15分钟，弃上清；