[发明专利]重组人偏肺病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组病毒，所述重组病毒按照包括如下步骤的方法制备：将分别含有冷适应、减毒流感病毒的PB2基因、含有冷适应、减毒流感病毒的PB1基因、含有冷适应、减毒流感病毒的PA基因、含有冷适应、减毒流感病毒的NP基因、含有冷适应、减毒流感病毒的M基因和含有冷适应、减毒流感病毒的NS基因的重组质粒，以及分别含有靶标流感病毒的HA基因和含有靶标流感病毒的NA基因的重组质粒共转染宿主细胞，培养得到重组病毒；其特征在于：

所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因、所述靶标流感病毒的HA基因和所述靶标流感病毒的NA基因中任一种基因被替换：所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因替换为名称为HMPV-PTBE-NS基因的重组DNA分子，所述靶标流感病毒的HA基因替换为名称为HMPV-PTBE-HA基因的重组DNA分子，所述靶标流感病毒的NA基因替换为名称为HMPV-PTBE-NA基因的重组DNA分子；

所述HMPV-PTBE-NS基因是在所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因的开放读码框的自5′末端起第375位至第376位核苷酸之间插入HMPV-PTBE基因，并保持所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因的其它核苷酸不变得到的重组DNA分子；

所述HMPV-PTBE-HA基因是在所述靶标流感病毒的HA基因的开放读码框的自5′末端起第51位至第52位核苷酸之间插入所述HMPV-PTBE基因，并保持所述靶标流感病毒的HA基因的其它核苷酸不变得到的重组DNA分子；

所述HMPV-PTBE-NA基因是在所述靶标流感病毒的NA基因的开放读码框的自5′末端起第192位至第193位核苷酸之间插入所述HMPV-PTBE基因，并保持所述靶标流感病毒的NA基因的其它核苷酸不变得到的重组DNA分子；

所述HMPV-PTBE-NS基因是在所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因的开放读码框的自5′末端起第375位至第376位核苷酸之间插入HMPV-PTBE基因，所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因的开放读码框的自5′末端起第375位核苷酸与所述HMPV-PTBE基因通过5′-TAATG-3′进行连接，所述HMPV-PTBE基因通过5′-TAA-3′与所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因的开放读码框的自5′末端起第376位核苷酸连接，并保持所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因的其它核苷酸不变得到的重组DNA分子；

所述HMPV-PTBE-HA基因是在所述靶标流感病毒的HA基因的开放读码框的自5′末端起第51位至第52位核苷酸之间插入HMPV-PTBE基因，所述靶标流感病毒的HA基因的开放读码框的自5′末端起第51位核苷酸与所述HMPV-PTBE基因通过5′- GCAGCAGCACCTGGAGCAGCA-3′进行连接，所述HMPV-PTBE基因通过与所述靶标流感病毒的HA基因的开放读码框的自5′末端起第52位核苷酸连接，并保持所述靶标流感病毒的NS基因的其它核苷酸不变得到的重组DNA分子；

所述HMPV-PTBE基因编码人偏肺病毒的T细胞优势抗原表位和人偏肺病毒的B细胞优势抗原表位；

所述靶标流感病毒为流感病毒株A/California/07/2009；

所述冷适应、减毒流感病毒为冷适应、减毒流感病毒株A/AnnArbor/06/60；

所述HMPV-PTBE基因编码氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的蛋白质；

所述HMPV-PTBE-NS基因的核苷酸序列是SEQ ID NO.2第15-1884位所示的DNA分子；

所述HMPV-PTBE-NA基因的核苷酸序列是SEQ ID NO.3第15-2428位所示的DNA分子；

所述HMPV-PTBE-HA基因的核苷酸序列是SEQ ID NO.4第15-2810位所示的DNA分子。

2.根据权利要求1所述的重组病毒，其特征在于：所述HMPV-PTBE基因的核苷酸序列是SEQ ID NO.1所示的DNA分子。

3.由权利要求1或2所述的重组病毒制备得到的嵌合疫苗。

4.权利要求1或2所述的重组病毒在制备预防流感病毒和/或人偏肺病毒引起的疾病的产品中的应用。

5.权利要求3所述的嵌合疫苗在制备预防流感病毒和/或人偏肺病毒引起的疾病的产品中的应用。