[发明专利]重组人偏肺病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了重组人偏肺病毒及其制备方法和应用。本发明首先公开了重组病毒，该重组病毒的冷适应、减毒流感病毒的NS基因、靶标流感病毒的HA基因和靶标流感病毒的NA基因中任一种基因被替换。本发明进一步公开了上述重组病毒在制备预防和/或治疗流感病毒和/或人偏肺病毒引起的疾病的产品中的应用。本发明从基因水平对HMPV抗原表位和流感病毒基因组进行操作，制备冷适应流感病毒为载体的重组HMPV疫苗株，解决了HMPV疫苗免疫引发的免疫损伤难题，将是呼吸道传染性疾病疫苗领域的新里程碑。另外，本发明提供的HMPV嵌合疫苗保护更多人群免受流感病毒和HMPV之害，为实现“一苗两用”或“一苗多用”目的奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。具体涉及重组人偏肺病毒及其制备方法和应用。

背景技术

人偏肺病毒(Human metapneumovirus，HMPV)病毒是2001年由荷兰科学家van denHoogen BG发现的一种呼吸道病毒，现已成为人类急性呼吸道感染最终导致急性呼吸综合窘迫症(Acute respiratory distress syndrome，ARDS)的重要病原体。HMPV呈全球流行，在婴幼儿是仅次于呼吸道合胞病毒(Respiraory syncytial virus，RSV)引起呼吸道感染的第二位病原，小于1岁婴儿的感染率最高，也是引起免疫功能低下者和老年人下呼吸道感染的常见病因。权威资料显示，在急性呼吸道感染的婴幼儿中约10-12％是hMPV引起的，也是导致ARDS的重要病因。因此，HMPV防控形势严峻，已成为当今生命科学的重大科学问题。

疫苗接种是预防和控制人类传染病的最有效措施。近年来HMPV疫苗发展迅速，许多灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗已在动物实验中显示较好的免疫原性和免疫保护作用，有望为HMPV的免疫预防提供候选疫苗。然而，HMPV灭活疫苗、亚单位疫苗存在潜在免疫病理损伤，且注射途径不能诱导黏膜免疫及减毒活疫苗存在“毒力返祖”和免疫过激难题，给HMPV疫苗研发提出了挑战。因此，解决HMPV疫苗免疫引发的免疫损伤难题是发展安全、有效HMPV疫苗的关键。

当前，基于流感病毒反向遗传学技术(Reverse Genetics，RG)的冷适应流感减毒活疫苗已批准上市显示安全、有效，使流感病毒作为表达外源基因载体研究备受瞩目(Yamayoshi S，Kawaoka Y.Current and future influenza vaccines.Nature medicine2019；25：212-220.)。将流感病毒作为递送系统成功研制了可实现交叉免疫保护、安全有效、多价的嵌合疫苗候选株，然而将流感病毒作为表达HMPV病毒抗原表位的载体，用于研制重组HMPV病毒株至今尚未报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为如何有效避免HMPV疫苗免疫引发的免疫损伤难题。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了重组病毒。

本发明所述重组病毒按照包括如下步骤的方法制备：将分别含有冷适应、减毒流感病毒的PB2基因、含有冷适应、减毒流感病毒的PB1基因、含有冷适应、减毒流感病毒的PA基因、含有冷适应、减毒流感病毒的NP基因、含有冷适应、减毒流感病毒的M基因和含有冷适应、减毒流感病毒的NS基因的重组质粒，以及分别含有靶标流感病毒的HA基因和含有靶标流感病毒的NA基因的重组质粒共转染宿主细胞，培养得到重组病毒；

所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因、所述靶标流感病毒的HA基因和所述靶标流感病毒的NA基因中任一种基因被替换：所述冷适应、减毒流感病毒的NS基因替换为名称为HMPV-PTBE-NS基因的重组DNA分子，所述靶标流感病毒的HA基因替换为名称为HMPV-PTBE-HA基因的重组DNA分子，所述靶标流感病毒的NA基因替换为名称为HMPV-PTBE-NA基因的重组DNA分子；