[发明专利]一种钙卫蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种钙卫蛋白单克隆抗体包含重链可变区的VHCDR1‑3和轻链可变区的VLCDR1‑3序列及其制备方法和在炎症性肠病免疫检测中的应用，当cutoff值设150μg/g时，用于诊断炎症性肠病的灵敏度72％，阴性预测值90％以上。本发明成功获得鼠单克隆杂交瘤细胞株的基础上，测序并获得有效的抗体，应用该重组抗体制备定性或定量检测试剂盒具有性能稳定，定量准确等优点，能够实现对样本中钙卫蛋白高灵敏度、高特异性快速检测。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种钙卫蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术

粪钙卫蛋白(faecal calprotectin，FC)是一种分子量为36kDa的钙和锌的结合蛋白，是S100A8/A9结合蛋白基因的表达。其成分在中性粒细胞的细胞质所含比例最高，占30％～40％，是急性炎性细胞活化的标志物。其中粪便钙卫蛋白定量检测成为炎症性肠病、肠癌等肠道器质性疾病的重要标志物。

钙卫蛋白是由两条分子量14kD的重链(MRP14)和一条分子量为8kD的轻链(MRP8)以共价键连接而成的异三聚体蛋白，每条链可以结合两个钙离子，在钙离子存在的情况下具有抗蛋白酶的活性，并因具有螯合锌离子的能力而具有抗热性，这些特性使得钙卫蛋白在肠腔和外界环境中可以长期保持稳定而不被各种酶和细菌破坏。

目前虽然钙卫蛋白在人类生物体中多处被发现，包括：血清、唾液、脑脊液和尿液。但在粪便中容易测得，且其成分稳定，室温下可在大便中稳定存在7d左右，且不易被细菌和各种酶类破坏，不受饮食的影响。粪便钙卫蛋白(Faecal Calprotein，FC)测定具有无创伤性、操作简便、痛苦小、价格便宜等优点，临床实用性较强。

但是免疫学定量检测时需要检测到三聚体，如果用一对分别识别轻链和重链的单抗检测，可能导致检测结果不准确。

因此，亟待产生一种特异性结合能力强、识别准确度高的钙卫蛋白聚合体的单克隆抗体。

同时研究发现，在炎症性肠病(IBD)患者的粪便中的钙卫蛋白水平明显高于结肠癌患者及肠易激综合征(IBS)患者，并且与患者病变程度呈正相关。检测粪便中的钙卫蛋白可以作为区分炎症性肠病、结肠癌、肠易激综合征，并用来监测炎症性肠病的活动性，对疾病的复发、治疗效果具有重要指导意义。目前用于检测钙卫蛋白的方法主要是酶联免疫吸附试验(ELISA)，ELISA法虽然灵敏度较高，但是操作比较繁琐，检测耗时比较长，并且检测设备较大不便于移动，因此需要一个操作简便、检测快速的方法来检测钙卫蛋白的含量。

发明内容

为了解决现有技术的问题，一方面，本发明提供了一种识别多聚体钙卫蛋白不识别单体蛋白的单克隆抗体，所述钙卫蛋白单克隆抗体包含重链可变区的VHCDR1-3和轻链可变区的VLCDR1-3；

VHCDR1：GGATTCACTAGTAGCTATGCC

VHCDR2：ATTAGTAGTTATGGTAGCACC

VHCDR3：GCAACCTACAGGTACGAAGGGTTTGCTTAC

VLCDR1：ACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACTAT

VLCDR2：GGTACCAAC

VLCDR3：GCTCTATGGTACAGCAACCTTTGGGTG。

作为本发明实施方式的进一步改进，所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：1-3所示：

SEQ ID NO：1Gly-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Ala

SEQ ID NO：2Ile-Ser-Ser-Tyr-Gly-Ser-Thr