[发明专利]一种Mnep单体变体及其应用

权利要求书

1.一种Mnep单体变体，其特征在于，编码所述Mnep单体变体的核苷酸序列为SEQ IDNO：11所示。

2.一种包含至少一个权利要求1所述Mnep单体变体的构建体。

3.一种包含至少一个权利要求1所述Mnep单体变体的孔蛋白。

4.根据权利要求3所述的孔蛋白，其特征在于，所述孔蛋白的狭窄区孔道直径小于

5.根据权利要求3所述的孔蛋白，其特征在于，所述孔蛋白的狭窄区孔道直径小于

6.一种编码权利要求1所述的Mnep单体变体、权利要求2所述构建体或者权利要求3-5任一所述的孔蛋白的核苷酸序列。

7.一种包含权利要求6所述核苷酸序列的载体。

8.根据权利要求7所述的载体，其特征在于，所述的载体包含与权利要求1所述的Mnep单体变体或者权利要2所述构建体或者编码权利要求3-5任一所述的孔蛋白的核苷酸序列可操作性连接的启动子。

9.根据权利要求8所述的载体，其特征在于，所述的启动子为诱导型启动子或组成型启动子，其中，所述的诱导型启动子为乙酰胺诱导型启动子。

10.一种表达权利要求1所述的Mnep单体变体、权利要求2所述构建体或权利要求3-5任一所述的孔蛋白的细菌。

11.根据权利要求10所述的细菌，其特征在于，所述的细菌为新金色分枝杆菌。

12.一种产生Mnep孔蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括用包含权利要求7-9任一所述的载体转化权利要求10或11所述的细菌，诱导细菌表达Mnep孔蛋白。

13.一种表征目标多核苷酸的方法，其特征在于，包括：

(a)将目标多核苷酸与权利要求3-5任一所述的孔蛋白接触，使得所述目标多核苷酸序列穿过孔蛋白；和

(b)获取目标多核苷酸穿过孔蛋白时核苷酸与孔蛋白相互作用的一个或多个特征，以表征所述目标多核苷酸。

14.根据权利要求13述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中还包括目标多核苷酸与核酸结合蛋白、解旋酶、聚合酶、反转录酶、转位酶、核酸外切酶、端粒酶和/或拓扑异构酶中的一种或两种以上的组合接触的步骤，使得所述目标多核苷酸序列穿过孔蛋白的转位速度小于核酸结合蛋白、解旋酶、聚合酶、反转录酶、转位酶、核酸外切酶、端粒酶和/或拓扑异构酶不存在时的转位速度。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括向 横跨目标多核苷酸接触的孔蛋白施加电势差的步骤。

16.一种权利要求3-5任一所述的孔蛋白、权利要求1所述的Mnep单体变体、权利要求2所述构建体、权利要求6所述的核苷酸序列、权利要求7-9任一所述的载体或者权利要求10或11所述的细菌在表征目标多核苷酸中的应用。

17.一种表征目标多核苷酸的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求3-5任一所述的孔蛋白、权利要求1所述的Mnep单体变体、权利要求2所述构建体、权利要求6所述的核苷酸序列、权利要求7-9任一所述的载体或者权利要求10或11所述的细菌。

18.一种表征目标多核苷酸的装置，其特征在于，所述的装置包括权利要求3-5任一所述的孔蛋白、权利要求1所述的Mnep单体变体、权利要求2所述构建体、权利要求6所述的核苷酸序列、权利要求7-9任一所述的载体或者权利要求10或11所述的细菌。