[发明专利]放射性标记的寡核苷酸及其制备方法

说明书

本发明包含式I的放射标记的寡核苷酸，其中n、X¹、X²、连接体1、连接体2、Q和受体靶向部分同说明书I中定义的。可将式(I)的放射标记的寡核苷酸用于测定寡核苷酸在组织或体液中的生物分布和药代动力学。

本发明涉及式I的新放射性标记的寡核苷酸：

其中，

n、X¹和X²、连接体1和2、Q和受体靶向部分在下文中讨论，以及其制备方法，并涉及其在测定组织或体液中寡核苷酸生物分布和药代动力学中的用途。

为了使反义治疗方法有效，必须将寡核苷酸引入患者体内，并且必须到达要治疗的特定组织。必须将治疗药物的生物分布和药代动力学作为药物治疗的预备步骤而测定。因此，需要能够检测体液或组织中的寡核苷酸。Agrawal等人在Clin.Pharmacokinetics28，7(1995)中综述反义寡核苷酸药物动力学的某些方面。在药物例如反义寡核苷酸的体内药代动力学研究中使用的另一种成熟方法需要对化合物进行放射性标记，以便能够检测。在动物模型中，将放射性标记的寡核苷酸施用给动物，并通过提取寡核苷酸，随后放射自显影，评价寡核苷酸在体液和组织中的分布(参见Agrawal等人，Proc.Natl.Acad.Sci.88，7595-7599(1991))。

³⁵S-标记是一种成熟且广泛应用的技术。为了进行生物学研究，用H-膦酸酯化学方法，制备³⁵S-标记的寡核苷酸硫代磷酸酯(参见Garegg等人，Chem.Scr.25，280-282(1985))。

用¹⁴C和³H对合成的寡核苷酸进行放射性同位素标记目前是通过使用成熟的固相自动合成来完成的。在这种方法中，¹⁴C或³H核苷亚磷酰胺的组装需要两步方法，如US 5,847,104的图1中所示。然而，这种方法有几个缺点。由于放射性同位素是在第一步中引入的，(a)两步后的放射化学产率是有限的；(b)该操作经常遇到稀释问题，即通常将天然丰度同位素作为载体掺入，以保持可控的合成规模，导致最终低聚物的比活性较低和(c)亚磷酰胺3(图1)是一种易降解的反应种类，作为最终的放射性前体，其提出严格的储存和运输要求。

鉴于现有技术方法的不足，需要获得具有高比活性的放射性标记寡核苷酸的其他方法。

因此，本发明的目标是提供寡核苷酸放射性标记的新方法。

发现新开发的放射性标记的式I寡核苷酸可以实现所述目标：

其中，

n是0或1；

X¹和X²各自独立地是S或O；

连接体1是C_2-12-亚烷基桥、含有1～10个乙二醇单元的乙二醇桥或者下式的基于甘油的桥：

其中m是1～6的整数；

连接体2是任选氨基保护的氨基C_2-12-亚烷基桥、含有1～10个乙二醇单元的氨基乙二醇桥；

Q代表式2a或2b的残基

或

其中R^1*和R^2*是放射标记的C_1-6-烷基基团；

并且受体靶向部分是为寡核苷酸增加额外功能的部分(moiety)。

附图具有下述含义：