[发明专利]使用感染因子快速检测沙门氏菌属的方法和系统

权利要求书

1.一种重组噬菌体，其包含插入所述噬菌体基因组的晚期基因区内的指示基因，其中所述重组噬菌体特异性感染沙门氏菌属种(Salmonella spp.)。

2.权利要求1的重组噬菌体，其中所述重组噬菌体源自SEA1或TSP1或TSP11。

3.权利要求1的重组噬菌体，其中所述指示基因是密码子优化的，并编码产生内在信号的可溶性蛋白产物或与底物反应后产生信号的可溶性酶。

4.权利要求3的重组噬菌体，其还包括所述密码子优化的指示基因上游的非翻译区，其中所述非翻译区包括噬菌体晚期基因启动子和核糖体进入位点。

5.一种包含至少两种不同类型的重组噬菌体的混合组合物，其中至少一种所述重组噬菌体包含根据权利要求1的指示基因。

6.一种制备重组指示噬菌体的方法，其包括:

选择特异性感染目标致病菌的野生型噬菌体；

制备包含指示基因的同源重组质粒/载体；

将所述同源重组质粒/载体转化到目标致病菌中；

用所选野生型噬菌体感染所述转化的目标致病菌，从而允许所述质粒/载体与所述噬菌体基因组之间发生同源重组；以及

分离重组噬菌体的特定克隆。

7.权利要求6的方法，其中制备同源重组质粒/载体包括:

确定所选噬菌体的基因组的晚期区中的天然核苷酸序列；

注释所述基因组并鉴定所选噬菌体的主要衣壳蛋白基因；

设计所述主要衣壳蛋白基因下游的用于同源重组的序列，其中所述序列包含密码子优化的指示基因；以及

将设计用于同源重组的序列整合到质粒/载体中。

8.权利要求7的方法，其中设计序列还包括在密码子优化的指示基因上游插入包含噬菌体晚期基因启动子和核糖体进入位点的非翻译区。

9.权利要求6的方法，其中所述同源重组质粒在所述密码子优化的指示基因的上游包含非翻译区，所述非翻译区包含噬菌体晚期基因启动子和核糖体进入位点。

10.权利要求6的方法，其中所述野生型噬菌体是沙门氏菌属特异性噬菌体，并且所述目标致病菌是沙门氏菌属种。

11.权利要求6的方法，其中分离重组噬菌体的特定克隆包括分离显示所述指示基因表达的克隆的有限稀释测定。

12.一种检测样品中沙门氏菌属种的方法，其包括：

将所述样品与源自沙门氏菌属特异性噬菌体的重组噬菌体一起孵育，所述噬菌体包含插入所述噬菌体基因组的晚期基因区内的指示基因；以及

检测由所述重组噬菌体产生的指示蛋白产物，其中所述指示蛋白产物的阳性检测表明沙门氏菌属种存在于样品中。

13.权利要求12的方法，其中所述样品是食品、环境、水、商业或临床样品。

14.权利要求12的方法，其中所述方法在食品安全行业标准尺寸的样品中检测少至10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或单个细菌。

15.权利要求13的方法，其中所述食品样品包括乳品、肉、鱼、蔬菜、鸡蛋、加工或未加工食品、RTE食品、干食品、香料或婴儿配方粉。

16.权利要求12的方法，其中将所述样品与包含至少两种不同类型的重组噬菌体的混合组合物一起孵育，其中至少一种所述重组噬菌体包含根据权利要求12的指示基因。