[发明专利]抗体药物缀合、纯化和调配的方法

说明书

本文提供产生、纯化和调配抗体药物缀合物(ADC)的方法。所述方法使用连续缀合过程、单程切向流过滤、逆流渗滤和/或在线过程自动化技术。所述方法减少过程时间和成本并且改进产物一致性。

技术领域

本发明的领域大体上涉及使用连续缀合过程、单程切向流过滤、逆流渗滤和/或在线过程自动化技术产生、纯化和调配抗体药物缀合物(ADC)的方法。

背景技术

与抗体药物缀合物(ADC)相关联的制造瓶颈是杂质的去除和ADC向稳定缓冲液中的交换。目前，这使用结合和洗脱柱色谱法或通过切向流过滤(TFF)的本体(常规)渗滤来实现。本体渗滤涉及以缓冲液A(即，缀合物最初所在的缓冲液)注入TFF系统。然后将ADC(于缓冲液A中)添加至渗余物容器中，在所述渗余物容器中与初始体积混合。渗余物容器的进料泵将来自渗余物的缀合物泵送于TFF膜上，在所述TFF膜上其经保留(并返回至渗余物)或丢弃。另一泵(渗滤泵)从所述容器进料至容纳于单独容器中的缓冲液B(即，ADC将交换至其中的缓冲液)，进料管线为从所述容器至渗余物容器中。将两个泵启动，并且渗余物容器中的缀合物开始通过TFF膜。在缓冲液经由废物流去除时，渗余物中的体积通过将缓冲液B(以相等体积)添加至渗余物容器中来维持。因此，缀合物缓慢地交换至缓冲液B中。此纯化方法成本高并且就大规模制造而言不是最佳的，因为需要使ADC在TFF膜上再循环多个循环。再循环导致高加工体积和时间以及ADC于潜在高剪切区域的暴露增加。使用大量加工的ADC制造需要约4-5天来生产一批经纯化、经调配的缀合物，通常产率低。据此，需要改进的ADC缀合过程。

发明内容

单程切向流过滤(SPTFF)系统诸如可购自Pall Life Sciences的系统用于生物加工平台，通常作为减少体积或浓缩生物分子例如抗体的方式。然而，本发明人意外地发现SPTFF可与抗体药物缀合反应相关联以不仅有助于抗体药物缀合物(ADC)的浓缩还有助于将未缀合产物从缀合反应去除并将纯化的ADC交换至调配缓冲液中，从而实现完全连续的ADC产生和加工方法。本发明人还发现逆流渗滤也可出于类似目的用于抗体药物缀合反应中。

在一些实施方案中，一种用于产生抗体药物缀合物(ADC)组合物的连续方法包括：(i)将抗体或其抗原结合片段与药物缀合以形成ADC，(ii)去除未缀合药物，和(iii)将所述ADC交换至稳定缓冲液中，其中(i)至(iii)是连续执行，并且其中单程切向流过滤(SPTFF)用于去除所述未缀合药物和/或将所述ADC交换至所述稳定缓冲液中。

在一些实施方案中，SPTFF用于去除所述未缀合药物以将所述ADC交换至所述稳定缓冲液中。在一些实施方案中，流过式柱色谱法用于去除所述未缀合药物并且SPTFF用于将所述ADC交换至所述稳定缓冲液中。

在一些实施方案中，一种用于产生抗体药物缀合物(ADC)组合物的连续方法包括：(i)将抗体或其抗原结合片段与药物缀合以形成ADC，(ii)去除未缀合药物，和(iii)将所述ADC交换至稳定缓冲液中，其中(i)至(iii)是连续执行，并且其中逆流渗滤用于去除所述未缀合药物和/或将所述ADC交换至所述稳定缓冲液中。

在一些实施方案中，逆流渗滤用于去除所述未缀合药物以将所述ADC交换至所述稳定缓冲液中。在一些实施方案中，流过式柱色谱法用于去除所述未缀合药物并且逆流渗滤用于将所述ADC交换至所述稳定缓冲液中。

在一些实施方案中，所述方法还包括预加工所述抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的所述预加工是以(i)至(iii)连续执行。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的所述预加工使用SPTFF执行。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的所述预加工使用逆流渗滤执行。在一些实施方案中，在预加工中仅使用一个SPTFF或逆流渗滤步骤。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的所述预加工是在(i)至(iii)之前大量执行。

在一些实施方案中，所述方法还包括预加工药物以供缀合。