[发明专利]CRM197蛋白质表达在审
| 申请号： | 201980009157.1 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN112513066A | 公开（公告）日： | 2021-03-16 |
| 发明（设计）人： | 刘理成;卓逸明;邱家鸿 | 申请（专利权）人： | 台湾浩鼎生技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/00 | 分类号： | C07K14/00;C07K14/195;C07K14/21 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 张文辉 |
| 地址： | 中国台*** | 国省代码： | 台湾;71 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | crm197 蛋白质 表达 | ||
1.一种产生CRM197蛋白质的方法，包括：
培养包含具有多核苷酸的表达质粒的细胞，其中该多核苷酸包含：
(a)与SEQ ID NO:1至少90％相同的CRM197核苷酸序列，以及
(b)分泌信号序列，其于该CRM197核苷酸序列的5’端编码SEQ ID NO:2的氨基酸；以及
诱导该CRM197蛋白质的表达。
2.如权利要求1所述的方法，其中该分泌信号序列为果胶酸裂解酶B(PelB)序列。
3.如权利要求2所述的方法，其中该PelB序列来自欧文氏菌属种。
4.如权利要求1所述的方法，其中该表达质粒包含磷酸盐调节的启动子。
5.如权利要求4所述的方法，其中该磷酸盐调节的启动子为细菌的碱性磷酸酶A启动子。
6.如权利要求1所述的方法，其中该细胞包含大肠杆菌。
7.如权利要求1所述的方法，其中该CRM197蛋白质为可溶性的。
8.如权利要求1所述的方法，其中该CRM197蛋白质为周质的。
9.如权利要求1所述的方法，其中该CRM197蛋白质被折叠并包含内二硫键。
10.如权利要求1所述的方法，其中该CRM197蛋白质的表达温度为首先于37℃温育，然后降低至约20-25℃。
11.如权利要求1所述的方法，其中该诱导在pH 7.0-8.0于储存缓冲液中进行。
12.如权利要求11所述的方法，其中该储存缓冲液选自由MOPS缓冲液、Tris缓冲液以及铵缓冲液所组成的组。
13.一种多核苷酸，包括：
(a)与SEQ ID NO:1至少90％相同的CRM197核苷酸序列，以及
(b)分泌信号序列，其于该CRM197核苷酸序列的5’端编码SEQ ID NO:2的氨基酸。
14.一种表达质粒，包含：
如权利要求13所述的多核苷酸；以及
诱导型启动子，以启动该多核苷酸的表达。
15.如权利要求14所述的表达质粒，其中该表达质粒于2017年11月28日以ATCC登录号PTA-124609保藏。
16.一种宿主细胞，包含如权利要求13所述的多核苷酸或如权利要求14所述的表达质粒。
17.一种CRM197重组蛋白质，包括：
(a)多肽，其与从SEQ ID NO:1的核苷酸转录的氨基酸序列至少90％相同，以及
(b)SEQ ID NO:2的分泌信号序列，位于该多肽的N端。
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