[发明专利]纤维蛋白原测试

说明书

本发明涉及一种用于测量样品中纤维蛋白原水平的新颖且直接的方法，所述方法在紧急情况下特别有用。与常用的凝集测定不同，该新颖方法不依赖于凝血酶形成并且不受口服抗凝药物或其他化学品的存在干扰。

本发明涉及一种用于测量样品中纤维蛋白原水平的新颖且直接的方法，所述方法在紧急情况下特别有用。与常用的凝集测定不同，该新颖方法不依赖于凝血酶形成并且不受口服抗凝药物或其他化学品的存在干扰。

纤维蛋白原主要由肝脏合成，其正常范围介于1.5mg/ml血浆至3mg/ml血浆之间。纤维蛋白原是在出血性疾患和血栓形成中发生的血块形成的一部分。在正常情况下，纤维蛋白原形成由凝血酶(因子IIa)的作用激活，从而导致从纤维蛋白原的α多肽链和β多肽链的N末端切割两个短肽，即纤维蛋白肽A和B。纤维蛋白单体的新形成的N末端自发地与纤维蛋白单体的C末端相互作用以形成纤维蛋白聚合物，所述纤维蛋白聚合物在因子XIIIa的影响下交联以形成交联的纤维蛋白聚合物，也称为血块形成。

然而在大量失血的情况下，凝血酶或凝血酶原仍能够充分维持凝血级联-尽管处于低得多的水平-纤维蛋白原是达到临界水平的首个关键凝血因子。血块的质量在很大程度上取决于纤维蛋白原浓度。因此，纤维蛋白原状态是急诊室收治时的关键信息。即时且准确的纤维蛋白原水平测定对于在手术前、围手术和手术后阶段触发医疗策略至关重要，特别是在准备具有高出血风险的手术(例如心脏或肝脏手术)时。在纤维蛋白原水平低于临界浓度的情况下，必须向患者供应纤维蛋白原浓缩物等。

当前，所有可用的测试都依赖于在不同水平触发的凝集级联，这不允许直接确定样品中的纤维蛋白原水平。在将CaCl₂添加到样品(例如血液或血浆)中时，测量凝集的形成。它们的准确性受到例如肝素、维生素K拮抗剂或直接或所谓的新型口服抗凝剂(DOAC或NOAC)的药物的极大影响或干扰，这些药物均针对所述凝集级联的不同部分。这些干扰药物可导致错误的结果，所述错误的结果可能导致对患者的高风险。

如今的标准是所谓的“克劳斯测定(Clauss-assay)”(Mackie等人，ThrombHaemost.2002年6月；87(6):997-1005)，其是耗时的并且需要专门的缓冲液和凝血酶试剂以及高度的技术技能。校准不是直接的。该方法基于测试样品中的凝集能力与具有导出的纤维蛋白原浓度的参照样品中的凝集能力之间的比较。凝集期间其他因子(例如XIII因子)的参与在定量中是无法排除的，来自内源或外源(如药物或激素)的血液组分的变化和/或来自不同供应商的仪器和试剂的变化使得该方法容易受到许多参数的干扰。因此，不可能直接测量纤维蛋白原水平。

另一种可用的方法是测定凝血酶原时间(PT)，该方法在终点测量方面与克劳斯测定相似，即血浆纤维蛋白原水平是通过对参与凝集级联的因子进行光学测量或机械强度测量而间接确定的。用这种方法也不能直接测量纤维蛋白原水平。与克劳斯测定相比，PT的结果甚至更加可变。无法排除DOAC/NOAC的干扰。

另一种可能的方法是使用抗原-抗体特异性相互作用的原理的基于免疫的ELISA。ELISA技术基于检测ng/ml范围内的浓度，即需要将样品强稀释数百万倍以达到ELISA兼容范围，这很容易出错、繁琐并且在测量期间引入了不准确性。此外，该测试通常需要4个小时的实验室时间，因此不适用于紧急情况。测试的执行和/或解译需要训练有素的技术人员的许多技能。

因此，开发一种更准确、可靠、直接、独立于平台且快速的方法是持续的任务，所述方法有助于在紧急情况下以及临床实验室，包括床旁检测(point-of-care testing，POCT)、私人住宅或兽医的典型工作环境(例如围场或畜棚)中(每天)测量纤维蛋白原水平，从而实现对纤维蛋白原水平的定量测定，其独立于凝血级联工作，因此不受抗凝血药物或其他干扰化学品的(负面)影响。

出人意料的是，我们现在开发出了这样的测试方法，所述测试方法允许直接且定量地测量样品中的纤维蛋白原水平，所述方法适用于人类和动物两者。与现有技术测试方法(例如，克劳斯测定或PT)相反，该新颖的测试方法不涉及凝血级联的激活，因此独立于凝血酶形成而工作。