[发明专利]心肌细胞的制备方法

说明书

本发明的主要课题在于提供不进行人工基因导入而由体细胞制备心肌细胞的方法、通过该制备方法得到的心肌细胞、或者包含可以用于该制备方法的化学物质的组合的组合物。作为本发明，可以举出例如：一种心肌细胞的制备方法，其是通过直接分化诱导由体细胞制备心肌细胞的方法，该方法包括：在MEK抑制剂及cAMP诱导剂的存在下对体细胞进行培养的工序；通过该制备方法得到的心肌细胞；以及一种用于由体细胞制备心肌细胞的组合物，其是用于通过直接分化诱导由体细胞制备心肌细胞的组合物，所述组合物包含MEK抑制剂及cAMP诱导剂。通过本发明得到的心肌细胞在再生医学方面是有用的。

技术领域

(相关申请的相互参照)

本申请基于2018年1月30日提出申请的日本申请号第2018-13301号主张优先权，并将其公开内容全部导入本说明书的一部分。

本发明属于再生医学或由体细胞直接重编程(Direct Reprogramming)的技术领域。本发明涉及该技术领域中利用低分子化合物由体细胞直接制备心肌细胞的方法、以及利用所述制备方法制备的低分子化合物诱导性心肌细胞(ciCMs：chemical compoundinduced-Cardiomyocytes)。本发明还涉及该心肌细胞、以及可用于制备该心肌细胞的方法的组合物。

背景技术

随着近年来细胞相关研究的发展、特别是与多能细胞相关的研究的发展，以能够用于对个体进行移植的品质及量获得治疗用细胞正在变为可能。对于一些疾病，已经开始尝试将对治疗有效的细胞移植于患者。

间充质细胞形成了肌肉、骨、软骨、骨髓、脂肪及结缔组织等生物体的各种器官，有望作为再生医学的材料。间充质干细胞(mesenchymal stem cell：MSC)是存在于骨髓、脂肪组织、血液、胎盘及脐带等组织中的未分化细胞。由于具有分化为属于间充质系统的细胞的能力，因此间充质干细胞作为制备这些细胞时的起始材料而备受关注。另外，也正在研究利用间充质干细胞本身来重建骨、软骨、心肌等的再生医学。

另一方面，也报道了将成纤维细胞这样的体细胞直接转化为其它细胞的方法。例如，已知通过将成纤维细胞和化学物质一起进行培养而得到神经细胞(非专利文献1)。

对于心肌细胞，已知通过和包含GSK3抑制剂(CHIR99021)等的一定的化学物质一起进行培养，可由鼠胚胎成纤维细胞直接诱导(非专利文献2)。同样地，已知可以由人包皮成纤维细胞(HFF)或人胚肺成纤维细胞(HLF)直接诱导(非专利文献3)。

另外，专利文献1中记载了利用包含WNT激动剂、GSK3抑制剂、TGF-β抑制剂、细胞外信号调节激酶(ERK1)、Ras GTPase活性蛋白质抑制剂(Ras-GAP)、Oct-4激活剂、Rho相关的卷曲螺旋形成蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、铁螯合剂、KDM5B抑制剂、组蛋白甲基转移酶抑制剂、以及PDGF酪氨酸激酶抑制剂中的至少5种的组合物由人成纤维细胞直接诱导心肌细胞的发明。专利文献2中记载了通过在选自ALK6抑制剂及AMPK抑制剂中的至少一种抑制剂的存在下、并且在cAMP激活剂、ALK5抑制剂(TGF-β抑制剂)及ERK抑制剂的存在下对体细胞进行培养，由人成纤维细胞直接诱导心肌细胞的发明。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利申请公开第2016/0186141号公报

专利文献2：国际公开第2018/062269号

非专利文献

非专利文献1：Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition,2015年，56卷，3号，166-170页

非专利文献2：Cell Research,2015年，25卷，1013-1024页