[发明专利]用于鉴定病毒污染物的系统和方法

权利要求书

1.一种用于鉴定样品中的病毒的方法，包括：

裂解细胞培养物的样品中的真核细胞；

从所述样品中移除细胞碎片；

浓缩所述样品以产生渗余物；

用核酸酶处理所述渗余物以降解真核生物核酸；

从经核酸酶处理的所述渗余物中提取病毒核酸；以及

在无需扩增所述样品中的核酸的情况下对所述病毒核酸进行测序以鉴定所述病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述真核细胞包括中国仓鼠卵巢细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述真核细胞分泌蛋白质药物产物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述蛋白质药物产物选自抗体或其抗原结合片段、融合蛋白和重组蛋白。

5.根据权利要求1所述的方法，还包括处理所述细胞培养物以移除鉴定的所述病毒的步骤。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中使用冻融技术裂解所述细胞。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述移除细胞碎片的步骤包括将经裂解的所述样品离心以产生上清液，并过滤所述上清液以从所述样品移除细胞碎片。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述病毒是RNA病毒。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述病毒选自小鼠微小病毒(Minutevirus of mice,MVM)、K病毒、小鼠脑脊髓炎病毒(Mouse Encephalomyelitis virus)和小鼠腺病毒(Mouse Adenovirus)、MAV1、P12、EMC、乳酸脱氢酶病毒(LDV)、多瘤病毒、小鼠肝炎病毒(MHV)、仙台病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、呼肠孤病毒3型、克氏大鼠病毒(Kilham rat virus)和Toolan氏H-1病毒(Toolan’s H-l virus)。

10.一种用于检测细胞培养物样品中的病毒核酸的方法，包括：

裂解所述细胞培养物样品中的细胞以产生细胞碎片；

分离所述细胞碎片以产生上清液；

浓缩所述上清液以产生渗余物；

酶消化所述渗余物中的真核生物核酸；

从所述渗余物中提取病毒核酸；

在不扩增提取的所述病毒核酸的情况下对提取的所述病毒核酸进行测序，其中从所述测序获得的病毒读段多于从所述测序获得的细胞核酸读段。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述病毒读段为从所述测序获得的总读段的至少51％。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述病毒读段为从所述测序获得的总读段的50％至99％之间。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述病毒读段为从所述测序获得的总读段的至少80％。

14.根据权利要求10所述的方法，其中所述病毒读段为从所述测序获得的总读段的至少85％。

15.根据权利要求9所述的方法，其中所述病毒读段为从所述测序获得的总读段的至少90％。

16.根据权利要求9-15中任一项所述的方法，其中所述病毒是RNA病毒。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述测序在样品制备的8小时内完成。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述测序是实时纳米孔测序。