[发明专利]抗体亲和力成熟的方法

权利要求书

1.一种产生多核苷酸文库的方法，所述多核苷酸各自编码包含已知亲本互补性决定区(CDR)的目标抗体的框架区和至少一个相邻CDR，其中所述亲本CDR由已知亲本CDR多核苷酸序列编码，该方法的特征在于

i)提供编码所述抗体的第一框架区的多核苷酸，

ii)提供(i)的多核苷酸的第一PCR引物，

iii)提供多核苷酸的混合物，每个多核苷酸由元件A-B-C组成，

其中

A)是能够与第一框架区杂交的多核苷酸，

每个B)是包含与亲本CDR多核苷酸序列相同数目的密码子的多核苷酸文库的成员，其中所述文库的成员被设计为包含至少一个随机化密码子和

C)是能够与第二框架区杂交的多核苷酸，

iv)提供元件C)的第二PCR引物，

v)基于多核苷酸(i)至(iv)进行PCR，从而获得多核苷酸文库，

并且其中在没有亲本CDR多核苷酸序列存在下进行这样的PCR。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一框架区是FW1或FW4，其中如果所述第一框架区是FW1，则所述第二框架区是FW2，或如果所述第一框架区是FW4，则所述第二框架区是FW3，且其中如果所述第一框架区是FW1，则所述CDR是CDR1，或如果所述第一框架区是FW4，则所述CDR是CDR3。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一框架区是FW1，其中所述第二框架区是FW2，其中所述第一引物是FW1的正向引物且其中所述第二引物是FW2的反向引物，且其中所述CDR是CDR1。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一框架区是FW4，其中所述第二框架区是FW3，其中所述第一引物是FW4的反向引物且其中所述第二引物是FW3的正向引物，且其中所述亲本CDR是CDR3。

5.一种产生多核苷酸文库的方法，所述多核苷酸各自编码目标抗体的框架区和两个相邻互补性决定区(CDR)，所述目标抗体包含第一和第二已知亲本CDR，其中所述第一和第二亲本CDR由第一和第二已知CDR多核苷酸序列编码，所述方法的特征在于：

i)提供编码所述抗体的第一框架区的多核苷酸，

ii)提供多核苷酸的第一混合物，每个多核苷酸由元件A-B-C组成，

其中

A)是能够与第一框架区杂交的多核苷酸，

每个B)是包含与第一亲本CDR相同数目的密码子的第一多核苷酸的文库的成员，其中所述文库的成员被设计为包含至少一个随机化密码子，和

C)是能够与第二框架区杂交的多核苷酸，

iii)提供元件C)的第一PCR引物，

iv)提供多核苷酸的第二混合物，每个多核苷酸由元件A’-B’-C’组成，

其中

A’)是能够与所述第一框架区杂交的多核苷酸，

每个B’)是包含与第二亲本CDR多核苷酸序列相同数目的密码子的第二多核苷酸文库的成员，其中所述文库的成员被设计为包含至少一个随机化密码子，和

C’)是能够与第三框架区杂交的多核苷酸，

v)提供元件C’)的第二PCR引物，

vi)基于多核苷酸(i)至(v)执行PCR，从而获得多核苷酸文库，

且其中在没有任何亲本CDR多核苷酸序列存在下执行这样的PCR。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述所述第一框架区是FW2，其中所述第二框架区是FW1，其中所述第三框架区是FW3，其中所述第一亲本CDR是CDR1，其中所述第二亲本CDR是CDR2，其中所述元件C)的第一引物是FW1的正向引物，其中所述元件C’)的第二引物是FW3的反向引物。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述第一框架区是FW3，其中所述第二框架区是FW2，其中所述第三框架区是FW4，其中所述第一亲本CDR是CDR2，其中所述第二亲本CDR是CDR3，其中所述元件C)的第一引物是FW2的正向引物，其中所述元件C’)的第二引物是FW4的反向引物。