[发明专利]葡萄球菌属细菌的营养缺陷型菌株

权利要求书

1.一种重组葡萄球菌属细菌，其包含：

两个失活的丙氨酸消旋酶基因(alr1和alr2)；和

失活的D-丙氨酸转氨酶基因(dat)。

2.权利要求1的重组葡萄球菌属细菌，其中所述葡萄球菌属细菌依赖于D-丙氨酸用于生长。

3.权利要求1的重组葡萄球菌属细菌，其中所述葡萄球菌属细菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)(表皮葡萄球菌(S. epidermidis))及其亚种。

4.权利要求1的重组葡萄球菌属细菌，其中所述葡萄球菌属细菌进一步包含一种或多种另外的突变。

5.权利要求4的重组葡萄球菌属细菌，其中所述另外的突变包含失活的谷氨酸消旋酶基因MurI。

6.权利要求1-5中任一项的重组葡萄球菌属细菌，其中所述细菌用基于pUBTR114的载体进行转化。

7.权利要求6的重组葡萄球菌属细菌，其中所述基于pUBTR114的载体是pUBTR119*-Sal-GFP。

8.一种制备重组葡萄球菌属细菌的方法，其包括：

(i)将包含D-丙氨酸转氨酶(dat)敲除的质粒转化到葡萄球菌属菌株的感受态细胞内，其中所述葡萄球菌属菌株包含失活的丙氨酸消旋酶基因alr1和alr2(SEΔalr1Δalr2)；

(ii)在转化细胞中检测所述敲除质粒的存在；

(iii)温育步骤(ii)中鉴定的转化细胞；和

(iv)纯化分离的菌落。

9.权利要求8的方法，其进一步包括就D-丙氨酸营养缺陷型测试所述分离的菌落。

10.权利要求8的方法，其中使用聚合酶链反应(PCR)检测所述转化体中敲除质粒的存在。

11.权利要求8的方法，其中所述重组葡萄球菌属细菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)(表皮葡萄球菌(S. Epidermis))及其亚种。

12.权利要求8的方法，其进一步包括用基于pUBTR114的载体转化所述重组葡萄球菌属细菌。

13.权利要求12的方法，其中所述基于pUBTR114的载体是pUBTR119*-Sal-GFP。

14.一种重组葡萄球菌属细菌，其通过权利要求8的方法产生。

15.一种试剂盒，其包含权利要求1-8或14中任一项的重组葡萄球菌属细菌。

16.权利要求15的试剂盒，其进一步包含基于pUBTR114的载体。